[發明專利]一種量子點微球標記抗體的制備方法

有效

• 申請號: 202010271750.8
• 申請日: 2020-04-08
• 公開（公告）號: CN111426825B
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發明（設計）人: 王德建;王會勤;陳瑞;陳麗丹
• 申請（專利權）人: 廣州賽哲生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;C09K11/02;C09K11/88
• 代理公司: 廣州瑞之凡知識產權代理事務所(普通合伙) 44514
• 代理人: 黃愛君

本發明提供一種量子點微球標記抗體的制備方法，包括如下步驟：(1)十八烷基胺修飾的聚苯乙烯?co?馬來酸酐微球的制備；(2)量子點微球的制備：取十八烷基胺修飾的聚苯乙烯?co?馬來酸酐微球，加入油溶性量子點和二氯甲烷，超聲分散，離心去上清，水洗，得量子點微球；(3)活化：取量子點微球，洗滌，離心去上清，加入PBS緩沖液后，加入EDC和NHS，攪拌；(4)偶聯：加入PBS緩沖液及抗體偶聯；(5)清洗：離心去上清，用PBS緩沖液清洗后，得量子點微球標記的抗體。本發明屬于生物技術領域，本發明制得的標記有抗體的量子點微球粒徑均一性好，抗體標記后的活性高。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種量子點微球標記抗體的制備方法。

背景技術

量子點又稱為半導體熒光納米晶，主要是由II-VI族元素(如CdS、CdSe、CdTe、ZnSe等)和III-V族元素(如InP、InAs等)組成的納米顆粒，粒徑一般小于20納米。量子點由于電子-空穴被量子限域，連續的能帶結構變成具有分子特性的分立能級結構，受激后可以發射不同波長的熒光，并具有獨特優異的發光特性，因而成為新一代熒光材料。但是由于殼核材料之間帶寬差異較小，量子點穩定性不強，且配體容易被氧化，使量子點的熒光強度減弱或猝滅。因此，將量子點包裹于聚合物微球中，可進一步提高量子點的穩定性。量子點微球是通過將大量的量子點包裹于聚合物材料中，表現出更高的熒光強度,并且提高了量子點的光學穩定性。

目前，量子點微球作為一種新的熒光標記物，被廣泛用于標記生物細胞、抗體等，從而進一步用于生物抗原或抗體的檢測。中國專利申請CN 110618264A公開了一種基于量子點聚苯乙烯微球檢測抗AQP4抗體的方法，其中的量子點微球使用聚苯乙烯材料制備得到，存在微球粒徑的均一性差及標記后抗體的活性低等不足。

發明內容

為解決現有技術中存在的問題(粒徑均一性差、抗體標記后活性低)，本發明提供了一種量子點微球標記抗體的制備方法，采用溶脹法將油溶性量子點包裹于十八烷基胺修飾的聚苯乙烯-co-馬來酸酐微球中，并采用EDC和NHS偶聯技術將免疫抗體標記于量子點微球上，改善了量子點微球的粒徑均一性和抗體標記后活性。

本發明的目的將通過下面的詳細描述來進一步說明。

本發明提供一種量子點微球標記抗體的制備方法，包括以下步驟：

(1)十八烷基胺修飾的聚苯乙烯-co-馬來酸酐微球的制備：取聚苯乙烯-co-馬來酸酐(PSMA)加入到二甲基亞砜(DMSO)中，并加入十八烷基胺(ODA)，于60℃-80℃下攪拌至原料溶解，恢復至室溫后，加入N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，攪拌16-24h，反應完成后，離心去上清，水洗后，超聲分散溶于水中，得十八烷基胺修飾的聚苯乙烯-co-馬來酸酐微球；

(2)量子點微球的制備：取步驟(1)所得的十八烷基胺修飾的聚苯乙烯-co-馬來酸酐微球，加入水中第一次超聲分散后，再加入油溶性量子點和二氯甲烷，攪拌，第二次超聲分散，敞開反應瓶使二氯甲烷揮發，攪拌過夜，離心去上清，水洗后分散于pH7.0-7.5的硼酸緩沖液中，得量子點微球，2-8℃保存；

(3)活化：取步驟(2)所得的量子點微球，用pH7.0-7.5的PBS緩沖液洗滌，離心去上清，加入pH7.0-7.5的PBS緩沖液后，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，室溫攪拌30-60min，得活化量子點微球溶液；

(4)偶聯：向步驟(3)所得的活化量子點微球溶液中加入pH7.0-7.5的PBS緩沖液及抗體，攪拌1-5h，發生偶聯；

(5)清洗：偶聯完成后，離心去上清，用PBS緩沖液清洗后，得量子點微球標記的抗體。

量子點微球標記的抗體可保存于含吐溫-20的PBS緩沖液中，吐溫-20的含量為0.05％-0.1％，優選地，吐溫-20的含量為0.05％。