[發明專利]一種量子點微球標記抗體的制備方法

有效

• 申請號: 202010271750.8
• 申請日: 2020-04-08
• 公開（公告）號: CN111426825B
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發明（設計）人: 王德建;王會勤;陳瑞;陳麗丹
• 申請（專利權）人: 廣州賽哲生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;C09K11/02;C09K11/88
• 代理公司: 廣州瑞之凡知識產權代理事務所(普通合伙) 44514
• 代理人: 黃愛君

1.一種量子點微球標記抗體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）十八烷基胺修飾的聚苯乙烯-co-馬來酸酐微球的制備：取聚苯乙烯-co-馬來酸酐加入到二甲基亞砜中，并加入十八烷基胺，于60-80℃下攪拌至原料溶解，恢復至室溫后，加入N-羥基琥珀酰亞胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，攪拌16-24h，反應完成后，離心去上清，水洗后，超聲分散溶于水中，得十八烷基胺修飾的聚苯乙烯-co-馬來酸酐微球；

（2）量子點微球的制備：取步驟（1）所得的十八烷基胺修飾的聚苯乙烯-co-馬來酸酐微球，加入水中第一次超聲分散后，再加入油溶性量子點和二氯甲烷，攪拌，第二次超聲分散，敞開反應瓶使二氯甲烷揮發，攪拌過夜，離心去上清，水洗后分散于pH7.0-7.5的硼酸緩沖液中，得量子點微球，2-8℃保存；

（3）活化：取步驟(2)所得的量子點微球，用pH7.0-7.5的PBS緩沖液洗滌，離心去上清，加入pH7.0-7.5的PBS緩沖液后，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺，室溫攪拌30-60min，得活化量子點微球溶液；

（4）偶聯：向步驟（3）所得的活化量子點微球溶液中加入pH7.0-7.5的PBS緩沖液及抗體，攪拌1-5h，發生偶聯；

（5）清洗：偶聯完成后，離心去上清，用PBS緩沖液清洗后，得量子點微球標記的抗體；

所述步驟（2）中，二氯甲烷和水的體積比為1.5-5:47.5；第一次超聲分散的條件：150W、超聲5-10min；第二次超聲分散的條件：150W、超聲5-10min。

2.根據權利要求1所述量子點微球標記抗體的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中，聚苯乙烯-co-馬來酸酐、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺的摩爾比為1:6:6。

3.根據權利要求1所述量子點微球標記抗體的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中，油溶性量子點為核殼型量子點。

4.根據權利要求3所述量子點微球標記抗體的制備方法，其特征在于，所述核殼型量子點為CdSe/ZnS核殼型量子點或CdSSe/ZnS核殼型量子點。

5.根據權利要求1所述量子點微球標記抗體的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中，量子點微球、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺的質量比為200:9:12。

6.根據權利要求1所述量子點微球標記抗體的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中，離心的條件為：8000-10000r/min、離心5-8min；所述步驟（2）中，離心的條件為：8000-10000r/min、離心5-8min；所述步驟（3）中，離心的條件為：8000-10000r/min、離心5-10min；所述步驟（5）中，離心的條件為：8000-10000r/min、離心5-10min。

7.根據權利要求1所述量子點微球標記抗體的制備方法，其特征在于，所述步驟（4）中，加入的抗體和量子點微球的質量比為3:100。

8.根據權利要求1所述量子點微球標記抗體的制備方法，其特征在于，所述抗體選自降鈣素原抗體或羊抗兔IgG抗體。

9.一種量子點微球標記抗體，其特征在于，采用權利要求1至8中任一項所述量子點微球標記抗體的制備方法制得。