[發明專利]雙特異性嵌合抗原受體及其應用

在審

• 申請號: 202010260849.8
• 申請日: 2020-04-03
• 公開（公告）號: CN113493524A
• 公開（公告）日: 2021-10-12
• 發明（設計）人: 陳雪嬌;單娟娟;趙永春;沈俊杰;張巍;黃霞;徐艷敏;陳軍;趙文旭;齊亞男
• 申請（專利權）人: 重慶精準生物技術有限公司;重慶精準生物產業技術研究院有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/867;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00
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本發明屬于免疫治療技術領域，具體涉及一種可識別CD19和CD22腫瘤相關抗原的雙特異性嵌合抗原受體，一種該嵌合抗原受體的表達載體、CAR?T細胞及其應用。所述雙特異性嵌合抗原受體可識別CD19和CD22雙靶點，不僅可以有效的表達于T淋巴細胞，而且能夠減少腫瘤免疫逃逸的幾率，降低CAR?T治療后腫瘤復發率。

技術領域

本發明屬于免疫治療技術領域，具體涉及一種雙特異性嵌合抗原受體，包含雙特異性嵌合抗原受體的載體，一種表達雙特異性嵌合抗原受體的CAR-T細胞及其應用。

背景技術

CAR-T（嵌合抗原受體T）細胞療法在治療血液系統惡性腫瘤中已取得了顯著成果。但是由于腫瘤尤其是實體瘤的異質性，往往腫瘤細胞表面不止表達一個靶抗原，并且隨著研究的進展研發人員還發現經CAR-T細胞治療的少部分患者出現腫瘤細胞下調或突變其表面表達的CAR-T靶點抗原產生逃逸（Robbie G. Majzner et al. (2018) Tumor AntigenEscape from CAR T-cell Therapy），造成治療效果較差以及復發等情況。因此設計針對多靶點的CAR結構十分有必要，簡單的同時表達2個不同靶點的CAR涉及到不同的CAR結構感染能力不同，會產生多種CAR-T細胞亞群，不利于產品臨床應用；如果僅是簡單的兩個不同靶點CAR結構串聯于一個載體，這樣CAR載體較大不易轉導T細胞，不同的結構涉及到CAR載體病毒制備能力不同，CAR轉導能力不同，對T細胞產生的刺激不同，療效不同等多種因素。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于一種靶向CD19和CD22雙靶點的雙特異性嵌合抗原受體，所述雙特異性嵌合抗體可以同時識別CD19和CD22雙靶點，可以避免表達CD19腫瘤對CD19 CART的免疫逃逸，對經CD19 CART治療后復發但CD19為陰性的患者也可以起到治療作用。

隨著CAR-T治療臨床數據的積累，研究者們發現在CAR-T治療后復發的患者體內CAR-T針對的靶抗原被下調甚至“丟失”，本發明設計可同時識別兩個腫瘤相關靶點的雙特異性嵌合抗原受體來避免腫瘤表面其中之一抗原丟失，而導致的CAR-T細胞就失去“殺傷目標”。

為實現上述目的，本發明采用以下方案：

所述CAR結構為靶向CD19和CD22雙抗原的雙特異性嵌合抗原受體，并且雙特異性嵌合抗原受體結構為靶向CD19的嵌合抗原受體與靶向CD22的嵌合抗原受體經自剪切肽連接串聯；靶向CD19ScFv的氨基酸序列為SEQ ID NO.8，靶向CD22ScFv的氨基酸序列為SEQ IDNO.9。

進一步，所述的靶向CD19ScFv的氨基酸序列為SEQ ID NO.9，靶向CD22ScFv的氨基酸序列為SEQ ID NO.10。

進一步，所述靶向CD19ScFv的核苷酸序列為SEQ ID NO.2，靶向CD22ScFv的核苷酸序列為SEQ ID NO.3。

進一步，所述的靶向雙特異性位點的雙CAR自剪切多肽選自T2A、P2A、E2A、F2A以及內部核糖體進入位點IRES。

優選的，所述的嵌合抗原受體包含如SEQ ID NO.1的核苷酸序列。

優選的，所述的嵌合抗原受體連接胞外識別區與跨膜區域的hinge區核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；跨膜區域的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；胞內共刺激信號域為CD137，核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；胞內信號活化區域為CD3ζ，核苷酸序列如SEQ IDNO.7所示。

優選的，所述的嵌合抗原受體連接胞外識別區與跨膜區域的hinge區氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示；跨膜區域的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示；胞內共刺激信號域為CD137，氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示；胞內信號活化區域為CD3ζ，氨基酸序列如SEQ IDNO.13所示。