[發(fā)明專利]基于合金內(nèi)核的治療動脈瘤與血管狹窄用干細胞支架及其制法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010260690.X
• 申請日: 2020-04-03
• 公開（公告）號: CN111467579B
• 公開（公告）日: 2021-10-26
• 發(fā)明（設計）人: 曹毓琳;滕睿頔;穆士卿;王穎
• 申請（專利權）人: 北京臻溪谷醫(yī)學研究中心（有限合伙）
• 主分類號: A61L31/02
• 分類號: A61L31/02;A61L31/10;A61L31/14;A61L31/16;C12N5/0775
• 代理公司: 北京卓愛普專利代理事務所(特殊普通合伙) 11920
• 代理人: 王玉松;宋丹丹

本發(fā)明提供了一種基于合金內(nèi)核的治療動脈瘤與血管狹窄用多孔纖維網(wǎng)狀生物支架，該支架的制備方法包括以下步驟：合金金屬支架預處理：依次使用明膠、多聚賴氨酸和含有纖連蛋白與層粘連蛋白的混合溶液包覆合金金屬支架，制得預處理支架；附著：將預處理支架放置于間充質(zhì)干細胞的單細胞懸液中處理至間充質(zhì)干細胞附著于支架上，即得基于合金內(nèi)核的治療動脈瘤用多孔纖維網(wǎng)狀生物支架；本發(fā)明提供的基于合金內(nèi)核的治療動脈瘤與血管狹窄用多孔纖維網(wǎng)狀生物支架對間充質(zhì)干細胞的負載率高，方便將相應的間充質(zhì)干細胞定植到動脈瘤患處。

技術領域

本發(fā)明屬于生物材料技術領域，特別涉及基于合金內(nèi)核的治療動脈瘤與血管狹窄用干細胞支架及其制法

背景技術

動脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血(aSAH)是一種高發(fā)病率﹑高致死率疾病，近年來，細胞治療已成為治療各種疾病的新策略，目的是替代和恢復受損細胞的結(jié)構及功能。干細胞治療有望成為該類急性aSAH患者的一種輔助治療方法，以減輕患者腦出血后的繼發(fā)性損傷，同時降低患者短時間內(nèi)動脈瘤再出血的風險。但是細胞很難定植到動脈瘤患處，因此急需一種能夠幫助干細胞固定在動脈瘤處的載體材料。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決以上技術問題，本發(fā)明提供了一種基于合金內(nèi)核的治療動脈瘤與血管狹窄用多孔纖維網(wǎng)狀生物支架，該支架的制備方法包括以下步驟：

合金金屬支架預處理：依次使用明膠、多聚賴氨酸和含有纖連蛋白與層粘連蛋白的混合溶液包覆合金金屬支架，制得預處理支架；

附著：將預處理支架放置于間充質(zhì)干細胞的單細胞懸液中處理至間充質(zhì)干細胞附著于支架上，即得基于合金內(nèi)核的治療動脈瘤與血管狹窄用多孔纖維網(wǎng)狀生物支架。

進一步地，合金金屬支架的預處理具體包括以下步驟：

將合金金屬支架浸入濃度為0.5％-1.5％的明膠溶液中，室溫靜置4小時以上或放置于4℃條件下過夜，室溫風干；

將以上風干后的合金金屬支架浸入濃度為0.5％-1.5％的多聚賴氨酸溶液中，室溫靜置1-3小時，室溫風干；

將以上風干后的合金金屬支架浸入含有纖連蛋白和層粘連蛋白的混合溶液中，纖連蛋白和層粘連蛋白的濃度均為0.5％-1.5％，室溫靜置4小時以上或放置于4℃條件下過夜，即得。

進一步地，附著的具體包括以下步驟：

將預處理支架材料放置于間充質(zhì)干細胞的單細胞懸液中在37℃條件下攪拌培養(yǎng)30min，間充質(zhì)干細胞的細胞密度為5x10⁵個/mL，移除多余的單細胞懸液，補充等量的無血清培養(yǎng)基，將表面附著有間充質(zhì)干細胞的預處理支架放置于培養(yǎng)反應器中繼續(xù)培養(yǎng)，即得基于合金內(nèi)核的治療動脈瘤與血管狹窄用多孔纖維網(wǎng)狀生物支架。

進一步地，將表面附著有間充質(zhì)干細胞的預處理支架放置于培養(yǎng)反應器中繼續(xù)培養(yǎng)具體操作方法如下：將表面附著有間充質(zhì)干細胞的預處理支架放置于培養(yǎng)反應器內(nèi)貼壁培養(yǎng)30min，再更換無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)1天，培養(yǎng)條件如下：溫度為37.0±0.5℃、CO₂濃度為5.0±0.2％，濕度為飽和濕度，攪拌速度為20-40r/min。

進一步地，無血清培養(yǎng)基包括基礎培養(yǎng)基和添加劑，基礎培養(yǎng)基為DMEM/F12培養(yǎng)基；添加劑為濃度為20-30μg/mL的人纖連蛋白、濃度為5-15ng/mL的堿性成纖維細胞生長因子、濃度10-20ng/mL的人表皮細胞生長因子、濃度為0.5-1.5％的ITS、濃度為4-6％的人血白蛋白；濃度為0.5-1.5％的NEAA、濃度為0.05-0.15μmol/L的氫化考的松、濃度為0.05-0.15％的β-巰基乙醇。