[發明專利]基于合金內核的治療動脈瘤與血管狹窄用干細胞支架及其制法

有效

• 申請號: 202010260690.X
• 申請日: 2020-04-03
• 公開（公告）號: CN111467579B
• 公開（公告）日: 2021-10-26
• 發明（設計）人: 曹毓琳;滕睿頔;穆士卿;王穎
• 申請（專利權）人: 北京臻溪谷醫學研究中心（有限合伙）
• 主分類號: A61L31/02
• 分類號: A61L31/02;A61L31/10;A61L31/14;A61L31/16;C12N5/0775
• 代理公司: 北京卓愛普專利代理事務所(特殊普通合伙) 11920
• 代理人: 王玉松;宋丹丹

1.一種基于合金內核的治療動脈瘤與血管狹窄用多孔纖維網狀生物支架，其特征在于，所述支架的制備方法包括以下步驟：

合金金屬支架預處理：依次使用明膠、多聚賴氨酸和含有纖連蛋白與層粘連蛋白的混合溶液包覆合金金屬支架，制得預處理支架；

附著：將預處理支架放置于間充質干細胞的單細胞懸液中處理至間充質干細胞附著于支架上，即得基于合金內核的治療動脈瘤與血管狹窄用多孔纖維網狀生物支架。

2.如權利要求1所述的基于合金內核的治療動脈瘤與血管狹窄用多孔纖維網狀生物支架，其特征在于，所述合金金屬支架的預處理具體包括以下步驟：

將所述合金金屬支架浸入濃度為0.5％-1.5％的明膠溶液中，室溫靜置4小時以上或放置于4℃條件下過夜，室溫風干；

將以上風干后的合金金屬支架浸入濃度為0.5％-1.5％的多聚賴氨酸溶液中，室溫靜置1-3小時，室溫風干；

將以上風干后的合金金屬支架浸入含有纖連蛋白和層粘連蛋白的混合溶液中，所述纖連蛋白和所述層粘連蛋白的濃度均為0.5％-1.5％，室溫靜置4小時以上或放置于4℃條件下過夜，即得。

3.如權利要求1所述的基于合金內核的治療動脈瘤與血管狹窄用多孔纖維網狀生物支架，其特征在于，所述附著的具體包括以下步驟：

將預處理支架材料放置于間充質干細胞的單細胞懸液中在37℃條件下攪拌培養30min，所述間充質干細胞的細胞密度為5x10⁵個/mL，移除多余的單細胞懸液，補充等量的無血清培養基，將表面附著有間充質干細胞的預處理支架放置于培養反應器中繼續培養，即得基于合金內核的治療動脈瘤與血管狹窄用多孔纖維網狀生物支架。

4.如權利要求3所述的基于合金內核的治療動脈瘤與血管狹窄用多孔纖維網狀生物支架，其特征在于，將表面附著有間充質干細胞的預處理支架放置于培養反應器中繼續培養具體操作方法如下：將表面附著有間充質干細胞的預處理支架放置于培養反應器內貼壁培養30min，再更換無血清培養基培養1天，培養條件如下：溫度為37.0±0.5℃、CO₂濃度為5.0±0.2％，濕度為飽和濕度，攪拌速度為20-40r/min。

5.如權利要求3或4所述的基于合金內核的治療動脈瘤與血管狹窄用多孔纖維網狀生物支架，其特征在于，所述無血清培養基包括基礎培養基和添加劑，所述基礎培養基為DMEM/F12培養基；所述添加劑為濃度為20-30μg/mL的人纖連蛋白、濃度為5-15ng/mL的堿性成纖維細胞生長因子、濃度10-20ng/mL的人表皮細胞生長因子、濃度為0.5-1.5％的ITS、濃度為4-6％的人血白蛋白；濃度為0.5-1.5％的NEAA、濃度為0.05-0.15μmol/L的氫化考的松、濃度為0.05-0.15％的β-巰基乙醇。

6.如權利要求1所述的基于合金內核的治療動脈瘤與血管狹窄用多孔纖維網狀生物支架，其特征在于，所述間充質干細胞的單細胞懸液通過以下方法制得：將間充質干細胞使用原代培養基培養1-2周，對原代培養后的細胞進行傳代培養至細胞70％匯合、消化，即得間充質干細胞的單細胞懸液，所述原代培養基是以DMEM/F12培養基為基礎培養基，再加入濃度為8-12％的胎牛血清、濃度為8-12ng/mL的EGF細胞因子，培養條件為：溫度為37.0±0.5℃、CO₂濃度為5.0±0.2％、濕度為飽和濕度，每隔三天更換一次培養基。

7.如權利要求6所述的基于合金內核的治療動脈瘤與血管狹窄用多孔纖維網狀生物支架，其特征在于，所述消化所用的消化劑為0.25％胰酶-EDTA。

8.權利要求1所述的基于合金內核的治療動脈瘤與血管狹窄用多孔纖維網狀生物支架在制備治療動脈瘤與血管狹窄的產品中的應用。