[發(fā)明專利]一種乳桿菌GM_1及其選育方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010255998.5
• 申請(qǐng)日: 2020-04-02
• 公開（公告）號(hào): CN111647521A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳忠洪;陳華維;曾憲為
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 玉林市容縣奇昌種豬養(yǎng)殖有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N15/01;C12N1/04;C12R1/225
• 代理公司: 北京國(guó)坤專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11491
• 代理人: 趙紅霞

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種乳桿菌GM_1及其選育方法，所述乳桿菌GM_1的選育方法包括：待選育乳桿菌菌株的活化培養(yǎng)；制備乳桿菌接種液；加入亞硝基胍母液和滅菌磷酸緩沖液，離心、洗滌、稀釋，得亞硝基胍處理過的菌液；將亞硝基胍處理過的菌液進(jìn)行培養(yǎng)，得到乳桿菌突變?nèi)后w；挑選形態(tài)規(guī)則、特征明顯、菌落明顯大于其它菌落的菌落接種培養(yǎng)后，冷凍離心、凍干粉碎，得到選育后的乳桿菌GM_1凍干粉。本發(fā)明利用化學(xué)誘變的方法開發(fā)出的較大規(guī)模的乳桿菌突變?nèi)后w，不存在生物安全風(fēng)險(xiǎn)，遺傳穩(wěn)定，耗時(shí)短，成本低，可作為新的乳桿菌遺傳種質(zhì)資源庫(kù)，用于篩選任意性狀的優(yōu)質(zhì)乳桿菌菌種，且能夠滿足各種特征產(chǎn)品生產(chǎn)的需求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種乳桿菌GM_1及其選育方法。

背景技術(shù)

目前，乳桿菌是與人類生活關(guān)系密切的益生菌之一，廣泛應(yīng)用于食品發(fā)酵、工業(yè)乳酸發(fā)酵及醫(yī)療保健領(lǐng)域。其中，乳桿菌GM_1具有較強(qiáng)的耐酸、耐膽鹽能力，在消化道中有較強(qiáng)生命力，并對(duì)其有較強(qiáng)的粘附能力，同時(shí)大量動(dòng)物和人體實(shí)驗(yàn)表明，乳桿菌GM_1具有較強(qiáng)的抑制致病菌、降血脂、提高有機(jī)體抗氧化、保護(hù)肝臟、預(yù)防糖耐受量受損和II型糖尿病、調(diào)節(jié)有機(jī)體免疫力及抗腫瘤等益生功能。

現(xiàn)有乳桿菌的選育主要通過建立菌種庫(kù)、輻射誘變及基因工程改良等手段來選育優(yōu)質(zhì)乳桿菌菌種。建立較大規(guī)模的菌種資源庫(kù)耗時(shí)，成本高，并且不一定能收集到所需的優(yōu)質(zhì)菌種資源。基因工程改良菌主要用于工業(yè)等方面的特定用途，但在微生物菌種的選育方面還少有應(yīng)用。輻射誘變是一種物理誘變，誘變劑主要包括紫外線、X-射線、γ-射線，快速中子等，在誘變微生物菌種中較為常用，但選育出的優(yōu)質(zhì)益生菌種仍非常有限。因此，亟需一種新的乳桿菌選育方法，以便選育出活性高、形態(tài)規(guī)則、特征明顯、快速生長(zhǎng)、易于高密度培養(yǎng)的優(yōu)質(zhì)乳桿菌菌種。

通過上述分析，現(xiàn)有技術(shù)存在的問題及缺陷為：

(1)現(xiàn)有通過建立菌種庫(kù)選育乳桿菌菌種的方法中，建立較大規(guī)模的菌種資源庫(kù)耗時(shí)，成本高，并且不一定能收集到所需的優(yōu)質(zhì)菌種資源。

(2)現(xiàn)有通過基因工程改良菌主要用于工業(yè)等方面的特定用途，但在微生物菌種的選育方面還少有應(yīng)用。

(3)現(xiàn)有輻射誘變?cè)谡T變微生物菌種中較為常用，但選育出的優(yōu)質(zhì)益生菌種仍非常有限。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供了一種乳桿菌GM_1及其選育方法。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種乳桿菌GM_1的選育方法，所述乳桿菌GM_1的選育方法包括以下步驟：

步驟一，菌株活化培養(yǎng)：將待選育的乳桿菌菌株接種于MRS液體培養(yǎng)基中，并在溫度37℃與有氧的條件下暗中活化培養(yǎng)24h，傳代培養(yǎng)3代后，將得到的培養(yǎng)液劃線接種于MRS平板培養(yǎng)基上，并置于溫度37℃的條件下培養(yǎng)48h；

步驟二，從MRS平板培養(yǎng)基上挑選一個(gè)單菌落作為出發(fā)菌株，并接種于5ml MRS液體培養(yǎng)基中，于37℃靜置培養(yǎng)24～48h，傳代培養(yǎng)3代；再按3％的接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基中，于37℃靜置培養(yǎng)24～36h得活化的菌液，凍干保藏；

步驟三，制備接種液：將步驟二得到的乳桿菌單菌落置于5～8mL的生理鹽水中混合均勻得到乳桿菌懸液；用LSM培養(yǎng)液稀釋菌懸液至在波長(zhǎng)600～800nm條件下OD值為0.15～0.2，得到乳桿菌接種液；

步驟四，用無菌離心管中吸取乳桿菌接種液2.5ml，加入亞硝基胍母液和滅菌磷酸緩沖液定容至5.0ml，將離心管置于搖床上，溫度為36.5～37℃混合均勻，5000r/min離心6min，棄去上清液，洗滌，稀釋，得亞硝基胍處理過的菌液；

步驟五，將亞硝基胍處理過的菌液涂布于MRS平板培養(yǎng)基上于37℃培養(yǎng)24h后，挑選單菌落接種于液體培養(yǎng)基中，于37℃培養(yǎng)24h，得到乳桿菌突變單體，每個(gè)處理的新種質(zhì)一起組成突變?nèi)后w；