[發明專利]合成海藻糖的重組解脂耶氏酵母菌的構建方法

在審

• 申請號: 202010252783.8
• 申請日: 2020-04-01
• 公開（公告）號: CN111500617A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 程海榮;鄒亞文
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81;C12P19/04;C12R1/645
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 胡晶

1.一種合成海藻糖的重組解脂耶氏酵母菌的構建方法，其特征在于，以能合成赤蘚糖醇的解脂耶氏酵母作為海藻糖合成酶表達宿主，將海藻糖合成酶表面展示在該菌株表面獲得重組菌株。

2.如權利要求1所述的合成海藻糖的重組解脂耶氏酵母菌的構建方法，其特征在于，所述構建方法包括如下步驟：

S1、設計海藻糖合成酶基因表面展示表達盒，并合成該基因表達盒；

S2、將合成的海藻糖基因表面展示表達盒轉化能合成赤蘚糖醇的解脂耶氏酵母；

S3、篩選含有海藻糖基因表面展示表達盒的重組解脂耶氏酵母。

3.如權利要求2所述的合成海藻糖的重組解脂耶氏酵母菌的構建方法，其特征在于，所述海藻糖合成酶基因表面展示表達盒為含TreS編碼序列的表達盒，包含同源臂DNA序列、啟動子DNA序列、TreS基因編碼序列、終止子DNA序列。

4.一種利用如權利要求1所述的方法構建得到的重組解脂耶氏酵母菌在合成海藻糖中的用途。

5.一種利用如權利要求1所述的方法構建得到的重組解脂耶氏酵母菌合成海藻糖的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

A1、將重組解脂耶氏酵母菌發酵葡萄糖合成赤蘚糖醇；

A2、發酵結束后菌液分離得到含赤蘚糖醇的發酵液以及酵母菌細胞；

A3、以該酵母菌細胞作為全細胞催化劑，轉化麥芽糖合成海藻糖；

A4、在A3中的轉化液中加入氮源和無機鹽，接種釀酒酵母，發酵分解除海藻糖以外的雜質，或再加入糖化酶以分解未轉化完的麥芽糖；

A5、從A4中分離純化得到海藻糖。

6.如權利要求5所述的利用重組解脂耶氏酵母菌合成海藻糖的方法，其特征在于，步驟A3中，在所述酵母菌細胞中加入質量百分比濃度為10％～30％的麥芽糖水溶液，在溫度30～50℃，pH 3.0～8.0條件下振蕩或攪拌進行轉化得到含有海藻糖的轉化液。

7.如權利要求5所述的利用重組解脂耶氏酵母菌合成海藻糖的方法，其特征在于，步驟A4中的釀酒酵母能利用麥芽糖以及葡萄糖而不能利用產物海藻糖。

8.如權利要求5所述的利用重組解脂耶氏酵母菌合成海藻糖的方法，其特征在于，步驟A4中，所述釀酒酵母的接種量為1-5％。

9.如權利要求5所述的利用重組解脂耶氏酵母菌合成海藻糖的方法，其特征在于，步驟A4中，所述氮源為蛋白胨、酵母粉、酵母浸膏、玉米漿干粉、玉米漿、磷酸氫二銨中的一種或幾種的混合；所述無機鹽為硫酸鎂、氯化錳、氯化銅中的一種或幾種。

10.如權利要求9所述的利用重組解脂耶氏酵母菌合成海藻糖的方法，其特征在于，所述氮源的用量為5～25克/升；所述無機鹽用量為0～2.5克/升。