[發(fā)明專利]一種單個(gè)外泌體的分離方法和核酸測(cè)序方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010251176.X
• 申請(qǐng)日: 2020-04-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111394296A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡朝陽(yáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 豐能醫(yī)藥科技（上海）有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12N5/07
• 分類號(hào): C12N5/07;C12Q1/6869
• 代理公司: 北京勁創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11589
• 代理人: 張鐵蘭

1.一種單個(gè)外泌體的分離方法，包括以下步驟：

1)從體液中分離獲得批量外泌體；

2)將所述批量外泌體與油質(zhì)液滴溶液混合獲得混懸液；

3)將所述混懸液用微流控通道進(jìn)行分離獲得單個(gè)液滴包裹的單個(gè)外泌體；

所述油質(zhì)液滴溶液中單個(gè)油質(zhì)液滴的粒徑為150～250nm。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離方法，其特征在于，步驟2)中所述的批量外泌體與油質(zhì)液滴溶液的體積比為1:(8～12)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的分離方法，其特征在于，步驟2)中所述的批量外泌體與油質(zhì)液滴溶液的體積比為1:10。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分離方法，其特征在于，步驟2)中所述混合的溫度為20～25℃。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的分離方法，其特征在于，步驟2)中所述混合的時(shí)間為4～8min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離方法，其特征在于，步驟3)中所述的微流控通道為300nm級(jí)通道。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述體液包血液、眼淚、尿液、唾液、乳汁、腹水、腦脊液、鼻腔分泌物和陰道分泌物中的一種。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離方法，其特征在于，步驟1)中所述分離獲得批量外泌體的方法包括超速離心法、超濾法、體積排阻色譜、微流控、親和法和基于聚合物的共沉淀法中的一種。

9.一種單個(gè)外泌體的核酸測(cè)序方法，包括以下步驟：對(duì)權(quán)利要求1～8任意一項(xiàng)所述的分離方法分離獲得的單個(gè)外泌體進(jìn)行建庫(kù)測(cè)序或納米孔測(cè)序。