[發(fā)明專利]一種用于蔬菜尾菜青貯發(fā)酵的植物乳桿菌C20及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010239002.1
• 申請日: 2020-03-30
• 公開（公告）號: CN111705011B
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊鵬;辜運(yùn)富;馮文龍;張俊濤;封俊;陳強(qiáng);曾宗梁;趙珂;張瑞平;向泉桔;張宗錦;余秀梅;張映杰;謝良文;毛敏;熊維亮;閆芳芳;周歡;葉田會(huì)
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué);四川省煙草公司攀枝花市公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K30/18;C12R1/25
• 代理公司: 北京眾合誠成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 任葦

本發(fā)明公開了一種用于蔬菜尾菜青貯發(fā)酵的植物乳桿菌C20及其應(yīng)用，植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)C20的保藏編號為CCTCC M 2019985 C20，其16S rRNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。該菌株作為發(fā)酵添加劑接種于尾菜青貯飼料，可以降低青貯飼料的pH、氨態(tài)氮、乙酸和丁酸含量，提高青貯飼料的粗蛋白、可溶性碳水化合物及乳酸含量，抑制霉菌、芽孢桿菌等腐敗微生物生長，提高了尾菜青貯飼料的營養(yǎng)品質(zhì)，改善了飼料的適口性，在尾菜青貯方面具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種植物乳桿菌菌株，具體為一 種用于蔬菜尾菜青貯發(fā)酵的植物乳桿菌C20及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

尾菜是指蔬菜采收后，經(jīng)修整、分級、預(yù)冷、包裝等商品化處理 后，為提高其商品性而剝離的蔬菜傷、病、殘葉。尾菜的無序排放和 大量堆積，造成嚴(yán)重的資源浪費(fèi)和環(huán)境污染。青貯是解決這一環(huán)境問 題、合理利用尾菜資源的有效手段，如何尾菜提高青貯品質(zhì)也成為了 目前熱門的研究課題。

植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)是乳酸菌的一種，也是青 貯過程中的優(yōu)勢菌群。大量研究表明，植物乳桿菌能否在青貯過程中 大量繁殖，是影響青貯飼料營養(yǎng)品質(zhì)的關(guān)鍵。在青貯環(huán)境中植物乳桿 菌大量繁殖，產(chǎn)生乳酸，降低pH，抑制其它腐敗微生物的活動(dòng)，使 飼料的纖維含量下降3％～6％，粗蛋白含量提高0.5％～2％，從而延長 飼料保藏期，提高飼料適口性和消化率，改善飼料品質(zhì)。植物乳桿菌 菌株本身的產(chǎn)酸能力、耐酸能力、耐高溫能力和抑菌能力等發(fā)酵特性 的強(qiáng)弱是菌株能否大量繁殖成為優(yōu)勢菌群、發(fā)揮作用的決定性因素。 因此，從尾菜中分離篩選到具有良好發(fā)酵特性的植物乳桿菌制成青貯飼料添加劑對尾菜青貯飼料營養(yǎng)品質(zhì)的提升具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一株分離自萵筍尾菜的植物乳桿菌，其具 有產(chǎn)酸、耐酸、耐高溫和抗菌特性，旨在提高蔬菜尾菜青貯飼料的營 養(yǎng)品質(zhì)，為蔬菜尾菜資源的合理利用找到更優(yōu)方法，解決目前青貯乳 酸菌添加劑菌種功能單一、品性退化的現(xiàn)狀。

本發(fā)明具體通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

本發(fā)明提供的一種具有良好的發(fā)酵特性的植物乳桿菌 (Lactobacillusplantarum)C20，該菌株已進(jìn)行保藏，保藏單位：中 國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)；地址：湖北省武漢市武昌區(qū)八一路 299號武漢大學(xué)校內(nèi)；保藏日期：2019年12月2日；保藏編號為CCTCC NO：M 2019985。

本發(fā)明植物乳桿菌C20的16S rRNA序列如SEQ ID NO.1所示。

本發(fā)明從萵筍尾菜分離得到的植物乳桿菌C20，菌落形狀呈圓形 突起，表面光滑，邊緣整齊，乳白色，不透明，革蘭氏染色陽性，接 觸酶試驗(yàn)陰性，明膠液化試驗(yàn)陽性，兼性厭氧。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種所述植物乳桿菌C20的分離方 法，所述分離方法為收集廢棄的萵筍尾菜，厭氧發(fā)酵15天后進(jìn)行植 物乳桿菌的分離。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種所述植物乳桿菌C20的鑒定方 法，所述鑒定方法包括：對植物乳桿菌的產(chǎn)酸特性、耐酸特性、耐高 溫特性和抑菌特性進(jìn)行測定分析。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種利用所述植物乳桿菌C20制備 的發(fā)酵液，所述制備方法包括：將植物乳桿菌C20活化后接種于MRS 液體培養(yǎng)基中，37℃，120r/min的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)，培養(yǎng)48h后， 作為種子液以體積比1:1加入MRS液體培養(yǎng)基，30℃，120r/min的 恒溫?fù)u床中培養(yǎng)48h使其活菌數(shù)達(dá)到1×10⁸cfu/mL，取出備用。

本發(fā)明的另一目的在于提供所述的植物乳桿菌C20或其發(fā)酵液 在蔬菜尾菜青貯發(fā)酵中的應(yīng)用。

進(jìn)一步的，所述的應(yīng)用包括如下步驟：

(1)青貯原料及添加劑的準(zhǔn)備