[發明專利]一種重組蛋白的制備方法

在審

• 申請號: 202010228743.X
• 申請日: 2020-03-27
• 公開（公告）號: CN111411138A
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 周闖;張忠民
• 申請（專利權）人: 蘇州佑寧康生物技術有限公司
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C12N1/06;C12R1/19
• 代理公司: 北京艾皮專利代理有限公司 11777
• 代理人: 姜宇

本發明適用于生物技術領域，提供了一種重組蛋白的制備方法，其包括以下步驟：將重組蛋白的表達工程菌株進行活化培養，得到活化菌落；將所述活化菌落依次進行一級培養和二級培養，得到二級種子；將所述二級種子置于發酵培養基中進行發酵培養，得到發酵液；將所述發酵液進行離心處理，收集菌體；將所述菌體進行凍存后，再置于裂解液中進行裂解，然后經離心處理，得到以包涵體形式存在的重組蛋白；所述裂解液包括以下組分：三羥甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸、聚乙二醇辛基苯基醚。該制備方法能夠使菌體在自然條件下自行破碎，其不僅可以使得到的包涵體的蛋白完全不受外力的破壞，而且還可以使菌體的破碎率達到95%。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種重組蛋白的制備方法。

背景技術

目前，重組蛋白一般是通過對大腸桿菌等表達工程菌株進行發酵培養和誘 導表達而獲得的。其中，傳統重組蛋白的制備方法，往往需要通過超聲破碎機 或高壓勻漿機等菌體破碎設備對發酵誘導后的菌體進行破碎，才能獲得以包涵 體形式存在的重組蛋白。

然而，傳統重組蛋白的制備方法得到的包涵體存在破碎率較低的問題，而 且由于受外力影響，其還存在蛋白容易被損壞的問題，因此，目前亟待尋找一 種新的重組蛋白的制備方法。

發明內容

本發明實施例的目的在于提供一種重組蛋白的制備方法，旨在解決背景技 術中提出的問題。

本發明實施例是這樣實現的，一種重組蛋白的制備方法，包括以下步驟：

將重組蛋白的表達工程菌株進行活化培養，得到活化菌落；

將所述活化菌落依次進行一級培養和二級培養，得到二級種子；

將所述二級種子置于發酵培養基中進行發酵培養，得到發酵液；

將所述發酵液進行離心處理，收集菌體；

將所述菌體進行凍存后，再置于裂解液中進行裂解，然后經離心處理，得 到以包涵體形式存在的重組蛋白；每升所述裂解液包括以下組分：三羥甲基氨 基甲烷10～50mmol、乙二胺四乙酸2～10mmol、聚乙二醇辛基苯基醚0.005～0.02 L。

作為本發明實施例的一種優選方案，所述將重組蛋白的表達工程菌株進行 活化培養，得到活化菌落的步驟，具體包括：

將重組蛋白的表達工程菌株的濃度稀釋至(10³～10⁴)個/mL后，再涂布于LB 固體瓊脂培養皿上，并置于35～38℃的恒溫條件下進行活化培養，得到活化菌落。

作為本發明實施例的另一種優選方案，所述一級培養的方法包括以下步驟：

挑取所述活化菌落接種到LB液體培養基中，并置于35～38℃的溫度下進行 震蕩培養，得到一級種子；

所述二級培養的方法包括以下步驟：

挑取所述一級種子接種到LB液體培養基中，并置于35～38℃的溫度下進行 震蕩培養，得到二級種子。

作為本發明實施例的另一種優選方案，每升所述發酵培養基包括以下組分： 甘油5～10g、NaCl 5～15g、蛋白胨10～20g、酵母粉10～20g。

作為本發明實施例的另一種優選方案，所述將所述二級種子置于發酵培養 基中進行發酵培養，得到發酵液的步驟，具體包括：

在35～38℃溫度下，將所述二級種子置于發酵培養基中進行發酵培養至OD 600為2～10后，再添加誘導劑進行誘導培養，然后降溫至4～10℃進行維持培養， 得到發酵液。

作為本發明實施例的另一種優選方案，所述步驟中，發酵培養的溶氧量控 制在40％以上。