[發明專利]一種重組蛋白的制備方法在審
| 申請號： | 202010228743.X | 申請日： | 2020-03-27 |
| 公開（公告）號： | CN111411138A | 公開（公告）日： | 2020-07-14 |
| 發明（設計）人： | 周闖;張忠民 | 申請（專利權）人： | 蘇州佑寧康生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12P21/00 | 分類號： | C12P21/00;C12N1/06;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京艾皮專利代理有限公司 11777 | 代理人： | 姜宇 |
| 地址： | 215400 江蘇省蘇州市太倉*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 重組 蛋白 制備 方法 | ||
1.一種重組蛋白的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
將重組蛋白的表達工程菌株進行活化培養，得到活化菌落；
將所述活化菌落依次進行一級培養和二級培養，得到二級種子；
將所述二級種子置于發酵培養基中進行發酵培養，得到發酵液；
將所述發酵液進行離心處理，收集菌體；
將所述菌體進行凍存后，再置于裂解液中進行裂解，然后經離心處理，得到以包涵體形式存在的重組蛋白；每升所述裂解液包括以下組分：三羥甲基氨基甲烷10~50mmol、乙二胺四乙酸2~10mmol、聚乙二醇辛基苯基醚0.005~0.02L。
2.根據權利要求1所述的一種重組蛋白的制備方法，其特征在于，所述將重組蛋白的表達工程菌株進行活化培養，得到活化菌落的步驟，具體包括：
將重組蛋白的表達工程菌株的濃度稀釋至(103~104)個/mL后，再涂布于LB固體瓊脂培養皿上，并置于35~38℃的恒溫條件下進行活化培養，得到活化菌落。
3.根據權利要求1所述的一種重組蛋白的制備方法，其特征在于，所述一級培養的方法包括以下步驟：
挑取所述活化菌落接種到LB液體培養基中，并置于35~38℃的溫度下進行震蕩培養，得到一級種子；
所述二級培養的方法包括以下步驟：
挑取所述一級種子接種到LB液體培養基中，并置于35~38℃的溫度下進行震蕩培養，得到二級種子。
4.根據權利要求1所述的一種重組蛋白的制備方法，其特征在于，每升所述發酵培養基包括以下組分：甘油5~10g、NaCl 5~15g、蛋白胨10~20g、酵母粉10~20g。
5.根據權利要求1所述的一種重組蛋白的制備方法，其特征在于，所述將所述二級種子置于發酵培養基中進行發酵培養，得到發酵液的步驟，具體包括：
在35~38℃溫度下，將所述二級種子置于發酵培養基中進行發酵培養至OD600為2~10后，再添加誘導劑進行誘導培養，然后降溫至4~10℃進行維持培養，得到發酵液。
6.根據權利要求5所述的一種重組蛋白的制備方法，其特征在于，所述步驟中，發酵培養的溶氧量控制在40%以上。
7.根據權利要求1所述的一種重組蛋白的制備方法，其特征在于，所述步驟中，凍存的溫度為-80~-20℃。
8.根據權利要求1所述的一種重組蛋白的制備方法，其特征在于，所述步驟中，裂解的溫度為15~30℃。
9.根據權利要求1所述的一種重組蛋白的制備方法，其特征在于，所述誘導劑為異丙基-β-D-硫代半乳糖苷。
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