[發明專利]一種稀土上轉換納米探針標記病毒的構建方法

在審

• 申請號: 202010225550.9
• 申請日: 2020-03-26
• 公開（公告）號: CN111363725A
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發明（設計）人: 常津;龐高舉;王漢杰;張英英;潘惠卓
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/02;C09K11/02
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 程小艷

1.一種稀土上轉換納米探針標記病毒的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)包膜生物素化的流感病毒的制備；

2)鏈霉親和素化稀土上轉換納米探針的合成；

3)利用鏈霉親和素化稀土上轉換納米探針標記包膜生物素化的病毒。

2.根據權利要求1所述的一種稀土上轉換納米探針標記病毒的構建方法，其特征在于，所述步驟1)的步驟具體為：

(1)將培養的MDCK進行傳代時，在培養皿中加入DSPE-PEG2000-Biotin，在二氧化碳孵箱中37℃培養18-24h；

(2)孵育完成后將流感病毒與MDCK細胞共孵育48-72h，至50％細胞死亡；收集細胞和上清于離心管中，在-80℃冰箱和常溫環境中反復凍融3次；濾膜過濾后4℃，離心除去細胞碎片；

(3)將濾液加至裝有20％蔗糖溶液的超速離心管中，離心后棄去上清；加入PBS溶液重懸沉淀，即獲得包膜生物素化的流感病毒。

3.根據權利要求1所述的一種稀土上轉換納米探針標記病毒的構建方法，其特征在于，所述步驟2)的步驟具體為：

(1)表面羧基化稀土上轉換納米顆粒，制備1mg/ml稀土上轉換納米顆粒，取100μl向其中加入EDC和NHS各2mg，旋轉過夜后12000rpm離心20min，棄上清；

(2)加入100μl ddH2O重懸沉淀，加入50μl 1mg/ml鏈霉親和素，旋轉混勻2h；

(3)反應完成后12000rpm離心20min，棄上清，加入100μl ddH2O重懸即獲得鏈霉親和素化的稀土上轉換納米探針。

4.根據權利要求1所述的一種稀土上轉換納米探針標記病毒的構建方法，其特征在于，所述步驟3)的步驟具體為：

(1)按照1:1向100μl稀土上轉換納米探針中加入100μl病毒濃縮液，旋轉孵育30min；

(2)孵育完成后4℃12000rpm離心20min，加入ddH2O清洗2次后用100μlddH2O，即獲得稀土上轉換納米探針標記包膜的流感病毒。

5.根據權利要求1所述的一種稀土上轉換納米探針標記病毒的構建方法，其特征在于，包膜生物素化流感病毒的制備是利用DSPE-PEG2000-Biotin在細胞增殖過程中可自組裝至細胞膜上，利用流感病毒的出胞過程將Biotin標記至病毒包膜上。

6.根據權利要求1所述的一種稀土上轉換納米探針標記病毒的構建方法，其特征在于，鏈霉親和素化稀土上轉換納米探針的合成采用稀土上轉換納米探針表面修飾有鏈霉親和素(SA-UCNs)，在980nm激光激發下可發出540nm綠色熒光。

7.根據權利要求1所述的一種稀土上轉換納米探針標記病毒的構建方法，其特征在于，利用鏈霉親和素化稀土上轉換納米探針標記包膜生物素化的流感病毒是利用生物素-親和素共價結合原理，生物素化的流感病毒與SA-UCNs共孵育后，可實現稀土上轉換納米探針標記流感病毒包膜，標記效率90％。