[發(fā)明專利]一種適用于PCR實(shí)驗(yàn)的免提取念珠菌核酸樣本的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010224847.3
• 申請(qǐng)日: 2020-03-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111394347B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賀政新
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九八〇醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C12Q1/686;C12Q1/6806
• 代理公司: 石家莊冀科專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 13108
• 代理人: 孟玉寒

1.一種適用于PCR實(shí)驗(yàn)的免提取念珠菌核酸樣本的制備方法，其特征在于：所述制備方法為酶裂解和熱裂解相結(jié)合的方式，包括如下步驟：

a、酶裂解液的配制：將酵母裂解酶lyticase、蝸牛酶、β-巰基乙醇混合，并添加生理鹽水至混合液體積為100μL，得到酶裂解液；

b、酶裂解：將念珠菌標(biāo)本置于eppendorf管中，以PBS洗滌后離心，去除上清，向其中加入步驟a配制的酶裂解液100μL，水浴加熱裂解；

c、熱裂解：將完成酶裂解水浴的eppendorf管置金屬浴中，加熱裂解，念珠菌樣本經(jīng)過(guò)酶裂解和熱裂解后，10000轉(zhuǎn)/分鐘低溫高速離心10分鐘，上清即為制備好的念珠菌DNA樣本。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的適用于PCR實(shí)驗(yàn)的免提取念珠菌核酸樣本的制備方法，其特征在于：所述酵母裂解酶lyticase添加量為10-50U/100μL，蝸牛酶添加量為50-100μg/100μL，β-巰基乙醇添加量為1μL/100μL。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的適用于PCR實(shí)驗(yàn)的免提取念珠菌核酸樣本的制備方法，其特征在于：所述步驟b中酶裂解水浴溫度為30-37℃，水浴時(shí)間為30-60min。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的適用于PCR實(shí)驗(yàn)的免提取念珠菌核酸樣本的制備方法，其特征在于：所述步驟c中金屬浴熱裂解溫度為100℃，熱裂解時(shí)間為5-10min。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的適用于PCR實(shí)驗(yàn)的免提取念珠菌核酸樣本的制備方法，其特征在于：所述生理鹽水為0.9％的氯化鈉溶液。