[發(fā)明專利]一種用于滅活新冠病毒的快速檢測(cè)試劑盒及方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010220970.8
• 申請(qǐng)日: 2020-03-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111323511B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳建國(guó);朱維罡;吳偉根;吳英萍;李游江
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第四醫(yī)院（浙江省義烏醫(yī)院;浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第四醫(yī)院醫(yī)共體）
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/36;G01N30/86;G01N33/68
• 代理公司: 杭州知見(jiàn)專利代理有限公司 33295
• 代理人: 趙越劍

1.一種用于滅活新冠病毒的快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括以下組分：（1）滅活反應(yīng)試管，內(nèi)含胰蛋白酶凍干粉，（2）酶解反應(yīng)液，（3）快速檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)多肽；所述快速檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)多肽的氨基酸序列為：ITFGGPTDSTDNNQNGGR；

所述酶解反應(yīng)液組成為：濃度500mmol/L的碳酸氫銨，濃度為50mmol/L的巰基乙醇，濃度為100 ng/mL的同位素標(biāo)記長(zhǎng)多肽；所述同位素標(biāo)記長(zhǎng)多肽的氨基酸序列為：PQSNQRSAPRI*TFGGPTDSTDNNQNGGRNGARPKQRRP，其中I為[¹³C₆,¹⁵N]-異亮氨酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于滅活新冠病毒的快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于：胰蛋白酶為堿性胰蛋白酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于滅活新冠病毒的快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述快速檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)多肽的濃度為100 ng/ml。

4.一種非醫(yī)學(xué)用途的降低醫(yī)護(hù)人員感染風(fēng)險(xiǎn)的新冠病毒快速檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）現(xiàn)場(chǎng)采集樣本直接放入已加入酶解反應(yīng)液的內(nèi)含100μg堿性胰蛋白酶凍干粉的2mL滅活反應(yīng)試管內(nèi)；現(xiàn)場(chǎng)采集樣本的同時(shí)，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)以快速檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)多肽作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜為檢測(cè)儀器，進(jìn)樣分析，建立標(biāo)準(zhǔn)圖譜；

（2）運(yùn)輸回實(shí)驗(yàn)室途中，滅活反應(yīng)試管放入便攜式孵育器內(nèi)， 37℃孵育30~60分鐘，然后將孵育器溫度上升至100 ℃保持30分鐘，以中止酶解反應(yīng)；

（3）回到實(shí)驗(yàn)室樣本經(jīng)0.22微米濾膜過(guò)濾，然后上液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)；

所述酶解反應(yīng)液組成為：濃度500mmol/L的碳酸氫銨，濃度為50mmol/L的巰基乙醇，濃度為100 ng/mL的同位素標(biāo)記長(zhǎng)多肽；所述同位素標(biāo)記長(zhǎng)多肽的氨基酸序列為：PQSNQRSAPRI*TFGGPTDSTDNNQNGGRNGARPKQRRP，其中I為[¹³C₆,¹⁵N]-異亮氨酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的液相檢測(cè)條件為：

色譜柱：Waters BEH 300 C18，規(guī)格100mm×2 .1mm，粒徑1 .7μm；

柱溫：40℃；樣品溫度：室溫；

流動(dòng)相：流動(dòng)相A：含0 .1％甲酸的水溶液；流動(dòng)相B：含0 .1％甲酸的乙腈溶液；

色譜分離梯度條件：在1分鐘內(nèi)將流動(dòng)相B含量從2％提升至45％；

流速：0.3mL/min；

進(jìn)樣體積：10μL。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的質(zhì)譜檢測(cè)條件為：

ESI+離子源，毛細(xì)管電壓：3.5kv，錐孔電壓：25V，脫溶劑溫度：400℃，脫溶劑氣流量：650L/min，錐孔反吹氣流量：20L/hr，碰撞室壓力：3 .0×10^-3mbar；低端分辨率1：2 .5V，高端分辨率1：15 .0V，離子能量1：0 .5eV；低端分辨率2：2 .8V，高端分辨率2：15 .0V，離子能量2：1 .0eV；離子源溫度：120℃，提取器電壓：3.0V，監(jiān)測(cè)模式采用多反應(yīng)檢測(cè)模式MRM，母離子：925.9，子離子：1062.4、645.3。