[發明專利]用于雞傳喉疫苗株和野毒株的兩重PCR引物組及試劑盒在審
| 申請號： | 202010218895.1 | 申請日： | 2020-03-25 |
| 公開（公告）號： | CN111560468A | 公開（公告）日： | 2020-08-21 |
| 發明（設計）人： | 劉東;劉紅祥;李貴陽;曲心怡;李金積;王群義;李彬;王熊;沈巍 | 申請（專利權）人： | 青島易邦生物工程有限公司;青島英賽特生物科技有限公司;青島迪諾瓦基因科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 山東省青島市紅島*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 雞傳喉 疫苗 野毒株 兩重 pcr 引物 試劑盒 | ||
1.用于雞傳喉疫苗株和野毒株的兩重PCR引物組，其特征在于，該引物組包含兩組引物對，分別是通用型上下游引物對和疫苗株上下游引物對；其中，通用型上下游引物對包括SEQIDNO:1所示的通用型上游引物和SEQIDNO:2所示的通用型下游引物，疫苗株上下游引物對包括SEQIDNO:3所示的疫苗株上游引物和SEQIDNO:4所示的疫苗株下游引物。
2.根據權利要求1所述的用于雞傳喉疫苗株和野毒株的兩重PCR引物組，其特征在于，所述通用型上游引物、通用型下游引物、疫苗株上游引物、疫苗株下游引物的摩爾比為1：1：1：1。
3.用于雞傳喉疫苗株和野毒株的兩重PCR試劑盒，其特征在于，含有以下試劑：
A液：含有2xTaq PCR Mix的PCR反應液12.5uL、權利要求1所述的通用型上游引物和通用型下游引物各1uL、權利要求1所述的疫苗株上游引物和疫苗株下游引物各1uL、ddH2O3.5uL，其中各引物的濃度均為10uM；
B液：含有雞傳喉疫苗株和野毒株的目的基因的人工質粒各50uL，作為陽性對照；
C液：ddH2O 100uL，作為陰性對照。
4.根據權利要求3所述的用于雞傳喉疫苗株和野毒株的兩重PCR試劑盒，其特征在于，該試劑盒的PCR擴增反應的反應程序為：95℃變性3min；95℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，循環30次；72℃延伸10min。
5.根據權利要求3所述的用于雞傳喉疫苗株和野毒株的兩重PCR試劑盒，其特征在于，該試劑盒判定待測樣品中是否含有雞傳喉疫苗株或野毒株的方法為：在紫外燈下觀察電泳檢測圖并與標準分子量相對照，若待測樣品于126bp和300bp處出現了兩條明亮的條帶，陰性對照沒有目的條帶，則證明該待測樣品中存在雞傳喉疫苗株；若待測樣品在126bp出現一條明亮的條帶，陰性對照沒有目的條帶，則證明該待測樣品存在雞傳喉野毒株。
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