[發明專利]一種耐高溫糞腸球菌的篩選與馴化方法

在審

• 申請號: 202010217211.6
• 申請日: 2020-03-25
• 公開（公告）號: CN111206006A
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發明（設計）人: 賴水明;張志榕;范格成;吳賢峰;吳有林
• 申請（專利權）人: 福建傲農生物科技集團股份有限公司;南昌傲農生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/36;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 吳文濱

本發明涉及一種耐高溫糞腸球菌的篩選與馴化方法，包括以下步驟：1)對糞腸球菌菌苔進行預處理；2)從步驟1)中挑選優勢菌落并進行多次極限溫度液體培養及平板菌落篩選，即得到耐高溫糞腸球菌；步驟2)中，極限溫度為49?51℃。與現有技術相比，本發明通過極限溫度培養法及平板菌落篩選法篩選耐熱個體，并通過極限溫度重復傳代培養的方法穩定其耐熱遺傳特性，最終使菌株馴化獲得耐熱性能，提高其在噴霧干燥生產工序中的存活率，降低生產成本；本發明操作程序簡單，重復性好，能大幅度提高糞腸球菌噴霧干燥的成活率，推動其生產與應用。

技術領域

本發明屬于益生菌發酵技術領域，涉及一種耐高溫糞腸球菌的篩選與馴化方法。

背景技術

糞腸球菌為革蘭氏陽性菌，屬于乳酸菌，是農業部添加劑目錄允許使用的安全菌種之一，在動物機體內具有保護屏障功效、營養功效、抑菌功效等作用，其在畜禽上的益生作用也廣泛得到認可。

與大多數乳酸菌一樣，糞腸球菌存在不耐熱、難儲存等問題，導致其生產加工及應用成本居高不下。目前糞腸球菌粉劑生產多以冷凍干燥為主，保證了其存活率，但是冷凍干燥技術存在設備昂貴及能耗高兩大問題。有一些廠家選擇微膠囊包被后低溫噴霧干燥的形式生產糞腸球菌粉劑，生產成本大為降低。然而，現有微膠囊包被噴霧干燥技術主要通過包被材料的選擇及包被工序的優化來提高干燥成活率，卻忽略了對菌株本身耐熱特性方面的改造，導致糞腸球菌干燥成活率普遍比較低。

發明內容

本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種耐高溫糞腸球菌的篩選與馴化方法，該方法步驟簡單，且重復性好，通過使菌株獲得耐熱性能的方式提高噴霧干燥成活率，降低生產成本。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：

一種耐高溫糞腸球菌的篩選與馴化方法，該方法包括以下步驟：

1)對糞腸球菌菌苔進行預處理；

2)從步驟1)中挑選優勢菌落并進行多次極限溫度液體培養及平板菌落篩選，即得到耐高溫糞腸球菌；

步驟2)中，所述的極限溫度為49-51℃。

進一步地，步驟1)中，預處理過程為：

1-1)從菌種斜面上挑選菌苔并接種于液體培養基中，之后在49-51℃靜置厭氧培養45-50h；

1-2)將液體培養基劃線接種于固體培養基上，之后在35-40℃厭氧培養45-50h。

進一步地，步驟2)中，極限溫度培養過程為：將優勢菌落接種于液體培養基中，之后在49-51℃靜置厭氧培養45-50h。

進一步地，步驟2)中，平板菌落篩選過程為：將液體培養基劃線接種于固體培養基上，之后在35-40℃厭氧培養45-50h。

進一步地，所述的液體培養基及固體培養基均為改良MRS培養基。

進一步地，所述的液體培養基包括以下組分：蛋白胨9-11g/L、牛肉膏9-11g/L、酵母浸粉4-6g/L、乙酸鈉4-6g/L、檸檬酸二胺1.5-2.5g/L、磷酸氫二鉀1.5-2.5g/L、吐溫800.5-1.5g/L、硫酸鎂0.3-0.8g/L及硫酸錳0.2-0.3g/L。

進一步地，所述的液體培養基的pH值為7-7.5。

進一步地，所述的固體培養基包括以下組分：蛋白胨9-11g/L、牛肉膏9-11g/L、酵母浸粉4-6g/L、乙酸鈉4-6g/L、檸檬酸二胺1.5-2.5g/L、磷酸氫二鉀1.5-2.5g/L、吐溫800.5-1.5g/L、硫酸鎂0.3-0.8g/L、硫酸錳0.2-0.3g/L及瓊脂15-20g/L。

進一步地，步驟2)中，進行極限溫度液體培養及平板菌落篩選的次數為3-5次。