[發(fā)明專利]檢測新型冠狀病毒的引物組合物和檢測方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010215837.3 | 申請日： | 2020-03-24 |
| 公開（公告）號： | CN111621592A | 公開（公告）日： | 2020-09-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 吳濤 | 申請（專利權(quán)）人： | 吳濤 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京酷愛智慧知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11514 | 代理人： | 劉娟 |
| 地址： | 750000 寧夏回族自治區(qū)銀*** | 國省代碼： | 寧夏;64 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 檢測 新型 冠狀病毒 引物 組合 方法 | ||
1.檢測新型冠狀病毒的引物組合物，其特征在于，包括通過環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)檢測新型冠狀病毒的引物組，所述引物組包括核苷酸序列為SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6的引物組和/或核苷酸序列為SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12的引物組。
2.權(quán)利要求1所述的引物組合物在制備檢測新型冠狀病毒的試劑盒中的應(yīng)用。
3.一種檢測新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于，包括按照比例混合的權(quán)利要求1所述的引物組合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于，還包括環(huán)介導(dǎo)等溫擴增反應(yīng)試劑、陽性對照標本和陰性對照標本。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于，還包括一定比例的氯化錳和鈣黃綠素，反應(yīng)結(jié)束后可以直接在日光或紫外燈下通過觀察反應(yīng)管顏色變化判定是否有新型冠狀病毒基因組存在。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒能夠檢測到至少100copies/mL新型冠狀病毒。
7.一種檢測新型冠狀病毒的方法，其特征在于，使用權(quán)利要求1所述的引物組合物，利用環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)平臺擴增靶基因的特定區(qū)域，篩查或檢測新型冠狀病毒。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測新型冠狀病毒的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)采集臨床樣本并滅活，提取核酸，得到病毒核酸；
(2)取無核酶離心管，分別加入HiScriptⅢEnzyme Mix.和Bst DNA聚合酶、反應(yīng)試劑混合液和含有權(quán)利要求1所述的引物組合物的引物混合液，震蕩混勻，瞬時離心，得到反應(yīng)混合液；取所述反應(yīng)混合液于反應(yīng)管中，分別向陰性對照管、陽性對照管加入對應(yīng)的試劑，向反應(yīng)檢測管中加入所述病毒核酸，瞬時離心；
(3)在60-65℃下恒溫擴增40-60min；
(4)對擴增產(chǎn)物進行可視化判讀。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測新型冠狀病毒的方法，其特征在于，所述反應(yīng)試劑混合液包括Tris-HCl(pH 8.8)、KCl、(NH4)2SO4、Triton X-100、甜菜堿和硫酸鎂。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測新型冠狀病毒的方法，其特征在于，根據(jù)含有擴增產(chǎn)物的反應(yīng)管在可見光或紫外燈下的顏色變化直接完成擴增結(jié)果的可視化判讀。
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