[發明專利]功能性嵌合凋亡小體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010215432.X
• 申請日: 2020-03-25
• 公開（公告）號: CN111529504B
• 公開（公告）日: 2023-01-10
• 發明（設計）人: 劉文娜
• 申請（專利權）人: 西安組織工程與再生醫學研究所
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/46;A61K47/04;A61K47/32;A61K31/7105;A61K35/17;A61K31/12;A61P29/00;A61P17/00;A61P1/00;A61P1/04;A61P11/00;A61P1/16;A61P13/12
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提供一種功能性嵌合凋亡小體，所述功能性嵌合凋亡小體包含凋亡小體膜和包裹于所述凋亡小體膜中的介孔二氧化硅納米粒子，所述凋亡小體膜為來源于免疫細胞的凋亡小體膜，所述介孔二氧化硅納米粒子負載有MicroRNA?21。為構建具有靶向運載功能和精確藥物釋放功能的特異性治療產品提供有效的手段。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種功能性嵌合凋亡小體及其制備方法和應用。

背景技術

細胞外囊泡（Extracellular vesicles ，EVs）是細胞間通訊中傳遞信號轉導分子的載體，可攜帶核酸、蛋白質、脂類等多種功能分子發揮作用。同時，天然膜賦予細胞外囊泡免疫原性低、同源靶向性強、循環時間長、生物屏障可達等諸多優點，是人工材料無法比擬的。受這些卓越性能的啟發，細胞外囊泡被視為新一代的交付系統。制備具有多種生物活性分子或靶向配體修飾的工程化細胞外囊泡，在理想位點產生治療效果，成為疾病治療的一種有吸引力的策略。

凋亡小體(Apoptotic bodies，ABs)是由凋亡細胞分泌的一種細胞外囊泡，由細胞膜向外起泡產生。有確鑿的證據表明，吞噬凋亡細胞可以調節免疫應答的抗炎方向。類似的結果也只反映在凋亡細胞/囊泡膜的吞噬，這可能與表面的磷脂酰絲氨酸密切相關。

工程化細胞外囊泡的制備采用了多種治療性分子加載方法，主要包括電穿孔法、預絡合法、胞外囊泡分離前親代細胞轉染法、皂素滲透法和超聲法。然而，現有的方法在以下方面仍有相當大的局限性，比如，無法去除與治療目的無關的殘留成分，可能導致潛在的威脅；現有方法中在表面生化偶聯各種功能分子可能會破壞細胞外囊泡的靶向性結構和功能；缺乏智能性的胞內控制開關，保證工程化細胞外囊泡運載的功能性治療分子準確有效的釋放。

潰瘍性結腸炎是一種病因和發病機制尚不明確的慢性非特異性腸道炎癥性病因，發病率在我國逐年上升，其發病機制并不明確。其病變部位主要局限于結腸黏膜和黏膜下層，發病時結腸黏膜充血、水腫，呈彌漫性炎癥反應，現有的治療手段很難將潰瘍性結腸炎完全根除。潰瘍性結腸炎反復發作和難以治愈一方面影響了患者的生活質量，另一方面還增加了癌變的可能，嚴重威脅到患者的生命健康。針對潰瘍性結腸炎的治療也缺乏特異性方法，成為近些年消化領域的熱點。目前可用的治療方法是減少炎癥、減輕癥狀，并在最好的情況下導致長期緩解。然而，長期使用這些藥物會帶來多種副作用，如感染、腎臟或肝臟損害。

同時，傳統和現有的治療皮膚損傷和潰瘍性結腸炎的藥物不僅對其他組織器官有副作用而且治療效果欠佳，需要一種有特定治療功能的藥物來代替以達到更好的效果且減輕或消除藥物本身帶來的副作用。因此，需要合適的具有天然生物功能和靶向性的原始細胞外囊泡以及新穎的制造策略來解決這些問題。

發明內容

本發明的目的在于，針對現有技術存在的問題，提供一種功能性嵌合凋亡小體及其制備方法和應用，為構建具有靶向運載功能和精確藥物釋放功能的特異性治療產品提供有效的手段。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：

一方面，提供一種功能性嵌合凋亡小體，所述功能性嵌合凋亡小體包含凋亡小體膜和包裹于所述凋亡小體膜中的介孔二氧化硅納米粒子，所述凋亡小體膜為來源于免疫細胞的凋亡小體膜，所述介孔二氧化硅納米粒子負載有MicroRNA-21。

優選地，所述免疫細胞選自淋巴細胞，所述淋巴細胞選自T細胞、B淋巴細胞或NK淋巴細胞。

優選地，所述MicroRNA-21通過靜電作用負載在所述介孔二氧化硅納米粒子上。

優選地，所述MicroRNA-21通過靶細胞內多肽的作用可響應性釋放于靶細胞內。

優選地，所述MicroRNA-21上標記有Cy5。以便于通過檢測熒光強度來進行跟蹤檢測。

優選地，所述MicroRNA-21通過靶細胞胞漿中的谷胱甘肽破壞二硫鍵導致MicroRNA-21釋放于靶細胞內。