[發明專利]功能性嵌合凋亡小體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010215432.X
• 申請日: 2020-03-25
• 公開（公告）號: CN111529504B
• 公開（公告）日: 2023-01-10
• 發明（設計）人: 劉文娜
• 申請（專利權）人: 西安組織工程與再生醫學研究所
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/46;A61K47/04;A61K47/32;A61K31/7105;A61K35/17;A61K31/12;A61P29/00;A61P17/00;A61P1/00;A61P1/04;A61P11/00;A61P1/16;A61P13/12
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1.功能性嵌合凋亡小體，其特征在于，所述功能性嵌合凋亡小體包含凋亡小體膜和包裹于所述凋亡小體膜中的介孔二氧化硅納米粒子，所述凋亡小體膜為來源于免疫細胞的凋亡小體膜，所述介孔二氧化硅納米粒子負載有MicroRNA-21。

2.根據權利要求1所述的功能性嵌合凋亡小體，其特征在于，所述免疫細胞選自淋巴細胞，所述淋巴細胞選自T細胞。

3.根據權利要求1所述的功能性嵌合凋亡小體，其特征在于，所述MicroRNA-21通過靶細胞內多肽的作用可響應性釋放于靶細胞內。

4.根據權利要求1所述的功能性嵌合凋亡小體，其特征在于，所述MicroRNA-21上標記有Cy5。

5.根據權利要求3所述的功能性嵌合凋亡小體，其特征在于，所述MicroRNA-21通過靶細胞胞漿中的谷胱甘肽破壞二硫鍵導致MicroRNA-21釋放于靶細胞內。

6.權利要求1-5任一項所述的功能性嵌合凋亡小體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）負載MicroRNA-21的介孔二氧化硅納米粒子制備：將介孔二氧化硅納米粒子和3-巰基丙基三甲氧基硅烷加入乙醇溶液中，超聲混合10min后，在60℃、氮氣條件下攪拌8-14小時，然后加入2,2'-二硫基聯吡啶和2-二甲胺基乙硫醇，繼續反應10-12h，獲得反應產物；反應產物使用乙醇清洗數次后離心獲得沉淀，將所述沉淀在真空下干燥，獲得活化的介孔二氧化硅納米粒子，將0.06mg 活化的介孔二氧化硅納米粒子和15nmol MicroRNA-21加入無酶水中，在4℃條件下吹打混勻，離心后棄去上清液，即得負載MicroRNA-21的介孔二氧化硅納米粒子；

2）功能性嵌合凋亡小體的制備：將負載MicroRNA-21的介孔二氧化硅納米粒子與凋亡小體膜混合，然后間歇性地超聲2min，在5000g條件下離心10min，取沉淀即獲得功能性嵌合凋亡小體，重懸于水中4℃儲存。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟2）中，所述活化的介孔二氧化硅納米粒子和凋亡小體膜的質量比為1:2。

8.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述凋亡小體膜由以下方法制備而成：將-80℃保存的凋亡小體解凍，在1000g條件下離心10min進行沉淀，重懸于低滲裂解液中，4℃下低滲處理1h，然后低功率超聲5s，在100g條件下離心10min除去碎屑后，再在10000g條件下離心10 min取沉淀，然后用水洗滌，直至囊泡內的成分去除為止，將收集的凋亡小體膜重懸在水中，4℃保存備用。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述低滲裂解液的組分為：10mM 三羥甲基氨基甲烷、10 mM MgCl₂和1mM 苯甲基磺酰氟。

10.權利要求1-5任一項所述的功能性嵌合凋亡小體在制備治療炎癥疾病產品中的用途。

11.根據權利要求10所述的用途，其特征在于，所述炎癥疾病包括皮膚炎癥、結腸炎、肺炎、肝炎或腎炎。

12.用于治療炎癥疾病的藥物，其特征在于，包含權利要求1-5任一項所述的功能性嵌合凋亡小體和藥學上可接受的載體。

13.根據權利要求12所述的藥物，其特征在于，所述藥學上可接受的載體選自水、PBS緩沖液或者生理鹽水。