[發明專利]利用高效液相色譜法檢測GLP-1或其類似物的方法

在審

• 申請號: 202010214753.8
• 申請日: 2020-03-24
• 公開（公告）號: CN111208242A
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發明（設計）人: 潘蘭;馮艷;張均;龔慶偉;蔣燕;李康;高相雷;郭林峰;李曉平;陳小鋒;李文佳
• 申請（專利權）人: 東莞市東陽光生物藥研發有限公司;廣東東陽光藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 北京睿陽聯合知識產權代理有限公司 11758
• 代理人: 郭奧博;張穎

本發明屬于GLP?1檢測技術領域，涉及一種利用高效液相色譜法檢測GLP?1或其類似物的方法。該方法使用流動相A和流動相B對含有GLP?1或GLP?1類似物的樣品進行洗脫，所述流動相A為含有硫酸鈉的乙腈水溶液，流動相B為乙腈水溶液。本發明提供的方法通過設置特定的流動相，可以減小基線波動，從而提高檢測靈敏度，提高主峰和雜質的分離效果，更有效地控制GLP?1產品或GLP?1類似物產品的質量。

技術領域

本發明涉及GLP-1檢測技術領域，具體涉及一種利用高效液相色譜法檢測GLP-1或其類似物的方法。

背景技術

胰高血糖素樣肽-1(本發明簡稱GLP-1)是一種由胃腸內分泌細胞產生的肽類物質，屬于一種腸促胰島素，能夠通過多種途徑來控制血糖。重組GLP-1為GLP-1類似物，在生產及儲存過程中會產生多種產品相關雜質，較難分離。

目前用于檢測多肽類物質的流動相多為三氟乙酸體系，三氟乙酸流動相的主要缺陷是基線波動大，導致靈敏度低，不易檢測到含量較小的雜質。并且在以三氟乙酸為流動相分離GLP-1或GLP-1類似物時，包含的雜質較多，分離效果不理想，無法很好的控制產品的質量。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的不足，提供一種利用高效液相色譜法(本發明簡稱HPLC)檢測GLP-1或其類似物的方法，以減小基線波動，從而提高檢測方法的靈敏度，提高主峰和雜質的分離效果，更有效地控制GLP-1產品或GLP-1類似物產品的質量。

本發明提供一種利用HPLC檢測GLP-1或其類似物的方法，該方法使用流動相A和流動相B對含有GLP-1或GLP-1類似物的樣品進行洗脫，所述流動相A由鈉鹽溶液和有機溶劑組成，流動相B由有機溶劑和水溶液組成；其中鈉鹽選自硫酸鈉、氯化鈉、乙酸鈉和磷酸鈉溶液中的一種或兩種，有機溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇和乙腈中的一種或兩種。

作為本發明的優選實施方案，所述流動相A中的鈉鹽為硫酸鈉，所述流動相A中硫酸鈉的濃度為10～50g/L，優選為15～40g/L，進一步優選為20～35g/L，更優選為23～28g/L，更優選為25～26g/L。本發明通過優化硫酸鈉在流動相A中的比例，降低基線波動，提高檢測GLP-1或GLP-1類似物的靈敏度，提高GLP-1產品或GLP-1類似物主峰與雜質的分離度。

作為本發明的優選實施方案，所述流動相A中的有機溶劑為乙腈，所述流動相A中乙腈的體積百分比為5％～20％，優選為10％～15％，例如10％。通過優化乙腈在流動相A中的比例，降低基線波動，提高檢測GLP-1或GLP-1類似物的靈敏度，提高GLP-1產品或GLP-1類似物主峰與雜質的分離度。

作為本發明的優選實施方案，所述流動相A的pH值為2.0～4.5，優選為2.5～3.5，更優選為3。緩沖液緩沖能力強，能夠提供穩定的pH，通過調節流動相的pH值，以抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，并改善峰形。

作為本發明的優選實施方案，所述流動相A的pH值的調節劑為磷酸緩沖溶液。

作為本發明的優選實施方案，所述流動相B中有機溶劑為乙腈，所述流動相B中乙腈的體積分數為60％～80％，優選為70％。通過優化乙腈在流動相B中的比例，降低基線波動，提高檢測GLP-1或GLP-1類似物的靈敏度，提高GLP-1產品或GLP-1類似物主峰與雜質的分離度。

作為本發明的優選實施方案，所述洗脫為梯度洗脫。

作為本發明的更優選實施方案，所述梯度洗脫的方式為：以流動相A和流動相B的總體積為100％，所述流動相A所占的體積百分比由80％遞減至30％，余量為流動相B。