[發(fā)明專利]利用高效液相色譜法檢測GLP-1或其類似物的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010214753.8
• 申請(qǐng)日: 2020-03-24
• 公開（公告）號(hào): CN111208242A
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘蘭;馮艷;張均;龔慶偉;蔣燕;李康;高相雷;郭林峰;李曉平;陳小鋒;李文佳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東莞市東陽光生物藥研發(fā)有限公司;廣東東陽光藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/06
• 分類號(hào): G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 北京睿陽聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11758
• 代理人: 郭奧博;張穎

1.一種利用高效液相色譜法檢測GLP-1或其類似物的方法，該方法使用流動(dòng)相A和流動(dòng)相B對(duì)含有GLP-1或GLP-1類似物的樣品進(jìn)行洗脫，其特征在于，所述流動(dòng)相A由鈉鹽溶液和有機(jī)溶劑組成，流動(dòng)相B由有機(jī)溶劑和水溶液組成；

所述鈉鹽選自硫酸鈉、氯化鈉、乙酸鈉和磷酸鈉溶液中的一種或兩種，所述有機(jī)溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇和乙腈中的一種或兩種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相A中的鈉鹽為硫酸鈉，所述流動(dòng)相A中硫酸鈉的濃度為10～50g/L，優(yōu)選為15～40g/L，進(jìn)一步優(yōu)選為20～35g/L，更優(yōu)選為23～28g/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相A中的有機(jī)溶劑為乙腈，所述流動(dòng)相A中乙腈的體積百分比為5％～20％，優(yōu)選為10％～15％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相A的pH值為2.0～4.5，優(yōu)選為2.5～3.5；

優(yōu)選地，調(diào)節(jié)所述流動(dòng)相A的pH值的調(diào)節(jié)劑為磷酸緩沖溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相B中有機(jī)溶劑為乙腈，所述流動(dòng)相B中乙腈的體積分?jǐn)?shù)為60％～80％，優(yōu)選為70％。

6.根據(jù)權(quán)利要求1～5任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述洗脫為梯度洗脫；

優(yōu)選地，所述梯度洗脫的方式為：以流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的總體積為100％，所述流動(dòng)相A所占的體積百分比由80％遞減至30％，余量為流動(dòng)相B。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脫的方式為：以流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的總體積為100％；0～8分鐘，所述流動(dòng)相A的體積百分比由80％遞減至65.5％，余量為流動(dòng)相B；8～29分鐘，所述流動(dòng)相A的體積百分比保持65.5％，余量為流動(dòng)相B；29～32分鐘，所述流動(dòng)相A的體積百分比由65.5％遞減至30％，余量為流動(dòng)相B；32～40分鐘，所述流動(dòng)相A的體積百分比保持30％，余量為流動(dòng)相B。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脫所使用的色譜柱為C₁₈柱，優(yōu)選為Waters X-select CSH C₁₈填充柱。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色譜法的色譜柱柱溫為35～45℃；

和/或，所述樣品的進(jìn)樣體積為1～10μL，優(yōu)選為4～6μL；

和/或，所述高效液相色譜法的流動(dòng)相流速為0.5～5mL/min，優(yōu)選為1～2mL/min；

和/或，所述高效液相色譜法的檢測波長為210～218nm；優(yōu)選為214nm。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述GLP-1或所述GLP-1類似物選自GLP-1(1-37)、利拉魯肽中間體、艾塞那肽、阿必魯肽、利司那肽。