[發明專利]唾液中新型冠狀病毒總抗體檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 202010213820.4
• 申請日: 2020-03-24
• 公開（公告）號: CN112034166A
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: 劉歡;高曉梅;楊衛平;李正均;王肖艷;劉月;王義德;王飛
• 申請（專利權）人: 鄭州方欣生物科技有限責任公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.唾液中新型冠狀病毒總抗體檢測試劑盒，包括上下兩塊塑料模板和COVID-19 IgG檢測試紙條、COVID-19 IgM檢測試紙條，每根試紙條均由底板以及底板上依次黏著的樣品墊、金標結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊所組成，每根試紙條的硝酸纖維素膜從樣品墊到吸水墊方向上依次噴有檢測線和質控線，其特征在于：兩個檢測試紙條中的玻璃纖維上預包被金標記的COVID-19NF蛋白濃度均為1-1.5 mg/ml，兩個檢測試紙條中的玻璃纖維上預包被金標記的COVID-19 S蛋白濃度均為1-1.5 mg/ml。

2.根據權利要求1所述唾液中新型冠狀病毒總抗體檢測試劑盒，其特征在于：兩個檢測試紙條中的玻璃纖維上預包被金標記的鏈霉親合素濃度均為1 mg/ml。

3.唾液中新型冠狀病毒總抗體檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1、膠體金墊的制備：

1）倒300mlHAuCl4溶液至潔凈試劑瓶中，然后取10ml球形金種子加入試劑瓶中，攪拌后加熱至40-55攝氏度；

2）加入8毫升0.1M對苯二酚溶液后反應15分鐘，然后離心分離金花；

3）將8毫升OD=1的金花分散在1XPBS緩沖液中，并加入5毫克分子量1800的HSCH2CH2O(CH2CH2O)CH2CH2COOH溶液，室溫下攪拌反應12小時，然后離心分離出去未反應的聚乙二醇，用聚乙二醇修飾金花的表面，從而增加金花的穩定性；

4）帶有羧基的金花用EDC/NHS偶聯反應，并將COVID-19NF蛋白、COVID-19 S蛋白和鏈霉親合素偶聯到金花表面；在具體的反應中，首先取8毫升OD=1的金花分散在pH=6.0的30mMMES緩沖液中，再取5毫克EDC和2毫克NHS加入2毫升的在pH=6.0的30mMMES緩沖液中并混合后加入金花溶液中；然后均勻混合20分鐘后；

5）離心分離出去未反應的EDC/NHS，用3毫升pH=7.4的10mMPBS緩沖液分散金花，將適合量的被COVID-19NF蛋白、COVID-19 S蛋白和鏈霉親合素加入到金花溶液均勻混合反應2.5小時；

6）離心分離出去未反應的被標記COVID-19NF蛋白、COVID-19 S蛋白和鏈霉親合素；

7）分別標記COVID-19NF蛋白、COVID-19 S蛋白和鏈霉親合素的金花，攪拌，然后靜置1h；

8）向步驟6中的金花分別加入10%血清白蛋白溶液各20ml；

9）把步驟8獲得的金標溶液放入離心45分鐘，取出清液，使用緩沖液各自定容到400ml，然后混勻；

10）將每種金標溶液按30ml/張的量，均勻的鋪在玻璃纖維紙上，使玻璃纖維紙干燥，然后將兩種金墊取出，分別置于裝有干燥劑的密封袋中，密封，待用；

S2、印膜的制備：

1）制備檢測線印膜溶液，取COVID-19抗原加入印膜緩沖液中，使濃度為1.5mg/ml；

2）制備質控線印膜溶液：取質控單克隆抗體加入印膜緩沖液中，使濃度為2.0mg/ml；

3）制備印膜：將兩種配好的印膜溶液分別包被到膜的質控線處，然后干燥；

S3、樣品墊的處理：

1）將玻璃纖維或無紡布浸泡于0.01mol/LPH＝7.3的磷酸鹽緩沖液中1.2小時；

2）晾干后備用；

S4、組裝、包裝：

1）將吸水紙、印膜、膠體金墊，樣品墊分別固定在PVP大板上；

2）切條后包裝。