[發(fā)明專(zhuān)利]唾液中新型冠狀病毒總抗體檢測(cè)試劑盒及其制備方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202010213820.4 | 申請(qǐng)日： | 2020-03-24 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN112034166A | 公開(kāi)（公告）日： | 2020-12-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 劉歡;高曉梅;楊衛(wèi)平;李正均;王肖艷;劉月;王義德;王飛 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 鄭州方欣生物科技有限責(zé)任公司 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | G01N33/569 | 分類(lèi)號(hào)： | G01N33/569;G01N33/558;G01N33/577 |
| 代理公司： | 暫無(wú)信息 | 代理人： | 暫無(wú)信息 |
| 地址： | 450000 河南省鄭州市鄭*** | 國(guó)省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 唾液 新型 冠狀病毒 抗體 檢測(cè) 試劑盒 及其 制備 方法 | ||
本發(fā)明公開(kāi)了唾液中新型冠狀病毒總抗體檢測(cè)試劑盒及其制備方法，包括上下兩塊塑料模板和COVID?19 IgG檢測(cè)試紙條、COVID?19 IgM檢測(cè)試紙條，每根試紙條均由底板以及底板上依次黏著的樣品墊、金標(biāo)結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊所組成，每根試紙條的硝酸纖維素膜從樣品墊到吸水墊方向上依次噴有檢測(cè)線和質(zhì)控線，其制備方法包括下列步驟：膠體金墊的制備；印膜的制備；樣品墊的處理；組裝、包裝。檢測(cè)樣本為唾液，可以在無(wú)創(chuàng)傷的情況下用比較易取的唾液樣本進(jìn)行檢測(cè)，避免抽血影響虛弱的患者。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及新型冠狀病毒檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體為唾液中新型冠狀病毒總抗體檢測(cè)試劑盒及其制備方法。
背景技術(shù)
現(xiàn)有的新型冠狀病毒檢測(cè)使用的檢測(cè)試劑盒通常都是采用抽血檢測(cè)，需要有創(chuàng)抽取人血對(duì)本就患病虛弱的患者有一定健康影響，為此我們提供唾液中新型冠狀病毒總抗體檢測(cè)試劑盒及其制備方法，檢測(cè)樣本為唾液，可以在無(wú)創(chuàng)傷的情況下用比較易取的唾液樣本進(jìn)行檢測(cè)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有的缺陷，提供唾液中新型冠狀病毒總抗體檢測(cè)試劑盒及其制備方法，檢測(cè)樣本為唾液，可以在無(wú)創(chuàng)傷的情況下用比較易取的唾液樣本進(jìn)行檢測(cè)，避免抽血影響虛弱的患者，可以有效解決背景技術(shù)中的問(wèn)題。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：唾液中新型冠狀病毒總抗體檢測(cè)試劑盒，包括上下兩塊塑料模板和COVID-19 IgG檢測(cè)試紙條、COVID-19 IgM檢測(cè)試紙條，每根試紙條均由底板以及底板上依次黏著的樣品墊、金標(biāo)結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊所組成，每根試紙條的硝酸纖維素膜從樣品墊到吸水墊方向上依次噴有檢測(cè)線和質(zhì)控線，兩個(gè)檢測(cè)試紙條中的玻璃纖維上預(yù)包被金標(biāo)記的COVID-19NF蛋白濃度均為1-1.5 mg/ml，兩個(gè)檢測(cè)試紙條中的玻璃纖維上預(yù)包被金標(biāo)記的COVID-19 S蛋白濃度均為1-1.5 mg/ml。
進(jìn)一步的，兩個(gè)檢測(cè)試紙條中的玻璃纖維上預(yù)包被金標(biāo)記的鏈霉親合素濃度均為1 mg/ml。
唾液中新型冠狀病毒總抗體檢測(cè)試劑盒的制備方法，包括以下步驟：
S1、膠體金墊的制備：
1）倒300mlHAuCl4溶液至潔凈試劑瓶中，然后取10ml球形金種子加入試劑瓶中，攪拌后加熱至40-55攝氏度；
2）加入8毫升0.1M對(duì)苯二酚溶液后反應(yīng)15分鐘，然后離心分離金花；
3）將8毫升OD=1的金花分散在1XPBS緩沖液中，并加入5毫克分子量1800的HSCH2CH2O(CH2CH2O)CH2CH2COOH溶液，室溫下攪拌反應(yīng)12小時(shí)，然后離心分離出去未反應(yīng)的聚乙二醇，用聚乙二醇修飾金花的表面，從而增加金花的穩(wěn)定性；
4）帶有羧基的金花用EDC/NHS偶聯(lián)反應(yīng)，并將COVID-19NF蛋白、COVID-19 S蛋白和鏈霉親合素偶聯(lián)到金花表面；在具體的反應(yīng)中，首先取8毫升OD=1的金花分散在pH=6.0的30mMMES緩沖液中，再取5毫克EDC和2毫克NHS加入2毫升的在pH=6.0的30mMMES緩沖液中并混合后加入金花溶液中；然后均勻混合20分鐘后；
5）離心分離出去未反應(yīng)的EDC/NHS，用3毫升pH=7.4的10mMPBS緩沖液分散金花，將適合量的被COVID-19NF蛋白、COVID-19 S蛋白和鏈霉親合素加入到金花溶液均勻混合反應(yīng)2.5小時(shí)；
6）離心分離出去未反應(yīng)的被標(biāo)記COVID-19NF蛋白、COVID-19 S蛋白和鏈霉親合素；
7）分別標(biāo)記COVID-19NF蛋白、COVID-19 S蛋白和鏈霉親合素的金花，攪拌，然后靜置1h；
8）向步驟6中的金花分別加入10%牛血清白蛋白溶液各20ml；
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