[發明專利]一種重組A型口蹄疫病毒VP1基因的塞內卡重組病毒、重組疫苗株及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010212907.X
• 申請日: 2020-03-24
• 公開（公告）號: CN111996201B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 鄭海學;楊帆;曹偉軍;蔣保余;朱紫祥;魏婷;鄭敏;田宏;張克山;張偉;劉永杰;黨文;馬旭升;李丹;茹毅;何繼軍;郭建宏;劉湘濤
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/41
• 分類號: C12N15/41;C12N15/42;C12N7/01;C12N15/85;A61K39/125;A61K39/135;A61P31/14
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 朱玲艷

本發明提供一種重組A型口蹄疫病毒VP1基因的塞內卡重組病毒、重組疫苗株及其制備方法和應用，涉及基因工程技術領域。本發明提供了塞內卡病毒重組核酸、包含所述重組核酸的塞內卡重組病毒、包含所述塞內卡重組病毒的塞內卡重組疫苗株及其制備方法和應用。本發明對SVV/FJ/001株基因缺失突變改造，在其cDNA中融合進A型FMDV的VP1基因，得到塞內卡重組病毒，該重組病毒能夠表達融合進的基因，且表達產物具有良好的反應原性；獲得的疫苗株抗原產能高，致病性顯著降低甚至對豬無致病性，滅活疫苗免疫動物后不僅能激發SVA的免疫應答，而且能產生針對融合基因的免疫活性，可用于塞內卡病毒及一種或多種非塞內卡病毒的防控。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種重組A型口蹄疫病毒VP1基因的塞內卡重組病毒、重組疫苗株及其制備方法和應用。

背景技術

塞內卡病毒A(Senecavirus A,SVA)，也稱塞內卡病毒(Senecavirus)、塞尼卡谷病毒(Seneca valley virus,SVV)，屬于小RNA病毒科(Picornaviridae)塞內卡病毒屬(Senecavirus)，也是該屬的唯一成員。該病毒感染豬能夠引起豬的原發性水泡病，與口蹄疫、豬水泡病和水泡性口炎等引起的臨床癥狀難以區分。SVA感染后能引起斷奶仔豬、保育、育肥和繁殖的各年齡段的豬發生水泡性病變，同時伴隨跛行、發熱、厭食、嗜睡等臨床癥狀，新生仔豬除了上述癥狀外，還可能存在持續的腹瀉、脫水等癥狀，甚至會突然死亡。

口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus,FMDV)屬于微RNA病毒科(Picornaviridae)口蹄疫病毒屬(Aphthovirus)的單股正鏈RNA病毒，包括A、O、C、Asial、SAT1、SAT2、SAT3七個血清型，型間無交叉保護。病毒基因組全長約8.5kb，由5’端非編碼區、ORF區和3’端非編碼區組成。編碼區編碼一個多聚蛋白，經病毒自身蛋白酶和宿主細胞蛋白酶作用逐級降解，形成多種中間體和成熟的4種結構蛋白(VP4、VP2、VP3、VP1)和8種非結構蛋白(L^pro、2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D)。其中，VP1作為結構蛋白基因編碼所得的最重要的衣殼蛋白，是決定FMDV抗原性、誘導機體產生中和抗體和激發保護性免疫應答的主要抗原蛋白，且在小RNA病毒科中，VP1被公認為是免疫原性最強的蛋白，因此，作為FMDV的抗原基因，表達VP1蛋白，保持其生物學活性與免疫原性，在FMDV基因工程疫苗的研究方面有重要作用。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種重組A型口蹄疫病毒VP1基因的塞內卡病毒重組核酸、包含所述重組核酸的塞內卡重組病毒、由所述重組核酸編碼的塞內卡重組病毒、包含所述塞內卡重組病毒的塞內卡重組疫苗株及其制備方法和應用。本發明通過對SVV/FJ/001株進行基因缺失突變改造，同時在SVAcDNA中融合進A型口蹄疫病毒的VP1基因，得到塞內卡重組病毒，該重組病毒能夠表達融合進的外源FMDV VP1基因，且表達產物具有良好的反應原性；制備得到的疫苗株抗原產能高、致病性顯著降低甚至對豬無致病性；滅活疫苗免疫動物不僅能產生SVA的免疫活性，且能產生針對融合基因的免疫活性。該疫苗株顯著提高了生物安全性，可用于塞內卡病毒及一種或多種非塞內卡病毒的防控。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種塞內卡病毒重組核酸，所述重組核酸的序列包括對塞內卡病毒株的5'UTR基因序列進行缺失突變改造，同時在塞內卡病毒cDNA的SphⅠ和NotⅠ酶切位點之間插入A型口蹄疫病毒的VP1基因。

優選的，對塞內卡病毒株的5'UTR基因序列進行缺失突變改造后的5'UTR基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；插入的A型口蹄疫病毒的VP1基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

優選的，所述塞內卡病毒株包括SVV/FJ/001株。