[發明專利]一種用于檢測鈣需求相關基因SNP位點的試劑盒及應用

有效

• 申請號: 202010212007.5
• 申請日: 2020-03-24
• 公開（公告）號: CN111206091B
• 公開（公告）日: 2021-12-24
• 發明（設計）人: 蘇震;陳春寶;張子詢
• 申請（專利權）人: 海南主健細胞分子遺傳醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6869
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 文小花

1.一種用于檢測鈣需求相關基因SNP位點的試劑盒，其特征在于：包括用于檢測鈣需求相關的GC基因RS2282679位點、IL-6基因RS1800795位點、PTH基因RS6254位點、VDR基因RS1544410位點和VDR基因RS2228570位點的引物組合物，所述引物組合物的序列為：

GC基因RS2282679位點的正反向PCR引物：SEQ ID No:1-2，正向延伸引物：SEQ ID No:11；

IL-6基因RS1800795位點正反向PCR引物：SEQ ID No:3-4，正向延伸引物：SEQ ID No:12；

PTH基因RS6254位點正反向PCR引物：SEQ ID No:5-6，正向延伸引物：SEQ ID No:13；

VDR基因RS1544410位點正反向PCR引物：SEQ ID No:7-8，正向延伸引物：SEQ ID No:14；

VDR基因RS2228570位點正反向PCR引物：SEQ ID No:9-10，正向延伸引物：SEQ ID No:15；

GC基因RS2282679位點、IL-6基因RS1800795位點、PTH基因RS6254位點、VDR基因RS1544410位點和VDR基因RS2228570位點的正向延伸引物濃度比為2:1:3:2:1；

GC基因RS2282679位點、IL-6基因RS1800795位點、PTH基因RS6254位點、VDR基因RS1544410位點和VDR基因RS2228570位點的各對正反向PCR引物濃度比為1:1:1:1:2；

正向延伸引物序列中的5’端采用不同數量的ploy T修飾；其中，GC基因RS2282679位點、IL-6基因RS1800795位點、PTH基因RS6254位點、VDR基因RS1544410位點和VDR基因RS2228570位點的正向延伸引物上的ploy T修飾數量依次為：22、16、35、29、19；

純化后多重PCR產物、正向延伸引物組合物與多重單堿基延伸反應試劑中的SNaPshotMultiplex KitABI的體積比為2:1:1。

2.如權利要求1所述的一種用于檢測鈣需求相關基因SNP位點的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括以下試劑：

(1)多重PCR擴增試劑：包括dNTPs、TaqDNA聚合酶、PCR反應緩沖液、1× GC-I緩沖液、Mg²⁺：

(2)PCR產物純化試劑：AP酶、Exol1酶、Seq buffer；

(3)多重單堿基延伸反應試劑：SNaPshot Multiplex KitABI；

(4)延伸產物純化試劑：SAP酶；

(5)測序變性反應試劑：120Liz SIZE STANDARD內標、Hi-Di甲酰胺。

3.如權利要求1所述的一種用于檢測鈣需求相關基因SNP位點的試劑盒，其特征在于：純化后的延伸產物與測序變性反應試劑中的120Liz SIZE STANDARD內標、Hi-Di甲酰胺的體積比為12:3:92。