[發明專利]一種土壤中反硝化細菌nirS基因絕對定量檢測的引物和試劑盒在審
| 申請號： | 202010198959.6 | 申請日： | 2020-03-20 |
| 公開（公告）號： | CN111235237A | 公開（公告）日： | 2020-06-05 |
| 發明（設計）人： | 汪義龍 | 申請（專利權）人： | 江蘇為青生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103 | 代理人： | 周敏;汪青 |
| 地址： | 215345 江蘇省蘇州市昆山*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 土壤 硝化細菌 nirs 基因 絕對 定量 檢測 引物 試劑盒 | ||
1.一種土壤中反硝化細菌nirS基因絕對定量檢測的引物，其特征在于：所述的引物的正向引物序列與GCAGCCCGAGTACAACAAG具有至少85％的同源性，反向引物序列與TCCAGACCGAGAACCACAC具有至少85％的同源性。
2.根據權利要求1所述的土壤中反硝化細菌nirS基因絕對定量檢測的引物，其特征在于：所述的引物的正向引物序列與GCAGCCCGAGTACAACAAG具有至少90％的同源性，反向引物序列與TCCAGACCGAGAACCACAC具有至少90％的同源性。
3.根據權利要求2所述的土壤中反硝化細菌nirS基因絕對定量檢測的引物，其特征在于：所述的引物的正向引物序列與GCAGCCCGAGTACAACAAG具有至少94％的同源性，反向引物序列與TCCAGACCGAGAACCACAC具有至少94％的同源性。
4.根據權利要求3所述的土壤中反硝化細菌nirS基因絕對定量檢測的引物，其特征在于：所述的引物的正向引物序列為GCAGCCCGAGTACAACAAG，反向引物序列為TCCAGACCGAGAACCACAC。
5.一種土壤中反硝化細菌nirS基因絕對定量檢測的試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒包括權利要求1至4中任一項所述的引物。
6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒還包括進行定量PCR檢測時所需試劑。
7.一種土壤中反硝化細菌nirS基因的絕對定量檢測方法，其特征在于：采用權利要求1至4中任一項所述的引物，或者權利要求5或6所述的試劑盒按照定量PCR檢測方法進行檢測。
8.根據權利要求7所述的絕對定量檢測方法，其特征在于：包括如下步驟：
(1)提取待測土壤中的DNA；
(2)提供標準品；
(3)將步驟(1)提取的DNA利用所述的引物進行定量PCR擴增；
(4)利用步驟(2)的標準品擬合標準曲線；
(5)利用步驟(3)的檢測結果及步驟(4)的標準曲線計算待測土壤中反硝化細菌nirS基因的拷貝數。
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