[發明專利]一種用于蛋白酶酶譜法的原位凝膠制備方法

有效

• 申請號: 202010197858.7
• 申請日: 2020-03-19
• 公開（公告）號: CN111253594B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 錢進;劉寅;陸卞和;趙媛媛;錢心緣;沈俊煒;朱鑫澤
• 申請（專利權）人: 河海大學
• 主分類號: C08J3/075
• 分類號: C08J3/075;C08L5/12;C08L5/16;C08L89/00;C12Q1/37
• 代理公司: 南京君陶專利商標代理有限公司 32215
• 代理人: 嚴海晨

1.一種用于蛋白酶酶譜法的原位凝膠制備方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）配液：凝膠采用瓊脂糖配制，加入明膠用于確定蛋白酶活性，加入β-環狀糊精增加所制備凝膠的穩定性，加入PBS作為保護劑；最后將以上原材料在去離子水中混合均勻；

（2）化膠：將所配置溶液置于高壓蒸氣滅菌鍋中，在0.5Mpa的條件下加熱至70℃，加熱時間持續5-15min，至溶液呈澄清狀態取出；

（3）冷凝成型：準備玻璃室厚度為1mm的玻璃室，玻璃室需可拆卸供所制備凝膠的取用；將所制備的凝膠溫度控制在65-75℃，澆鑄在玻璃腔室內冷卻成型；

（4）孵育：凝膠冷卻成型后立即拆開玻璃室的一面，穩定住凝膠的一面將其覆蓋在平整干燥的根際土壤表面；用塑料薄膜覆蓋住凝膠防止其失水干燥，在黑暗條件中以室溫孵育24小時；

（5）染色：將孵育好的凝膠取下，放置在蒸餾水中，用水平搖床以80rmp處理2分鐘以除去表面的附著的土壤；配置水合茚三酮染色溶液并將處理好的凝膠放置在染色溶液中著色10分鐘；

（6）脫色：將著色后的凝膠置于脫色溶液中在水平搖床中以80rmp處理25-35分鐘取出。

2.根據權利要求1所述的一種用于蛋白酶酶譜法的原位凝膠制備方法，其特征在于所述的步驟（1）配液中，凝膠采用1.4 （w/v）%瓊脂糖配制，明膠含量為0.08w/v%，β-環狀糊精含量為0.2 （w/v）%，PBS濃度為0.2 （v/v）%。

3.根據權利要求1所述的一種用于蛋白酶酶譜法的原位凝膠制備方法，其特征在于所述的步驟（5）染色中所用染色溶液用0.5 （w/v）%水合茚三酮配置，并用乙酸將溶液的pH調節至5.9。

4.根據權利要求1所述的一種用于蛋白酶酶譜法的原位凝膠制備方法，其特征在于所述的步驟（6）脫色中所用的脫色溶液用10 （v/v）%乙醇和10 （v/v）%乙酸配制。