[發明專利]用于檢測呼吸道感染病毒的核酸試劑、試劑盒、系統及方法

在審

• 申請號: 202010197605.X
• 申請日: 2020-03-19
• 公開（公告）號: CN111349720A
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發明（設計）人: 任麗麗;林笑冬;王曉艷;郭麗;楊海英;肖艷;岳素文;馮志迪;傅成波;王雷;王健偉;張志強
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院病原生物學研究所;北京卓誠惠生生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93
• 代理公司: 北京英創嘉友知識產權代理事務所(普通合伙) 11447
• 代理人: 耿超

1.一種用于檢測呼吸道感染病毒的核酸試劑，其中，所述核酸試劑包括分別彼此獨立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1-8所示的引物和SEQ ID NO.11-14所示的探針。

2.根據權利要求1所述的核酸試劑，其中，所述核酸試劑中，分別由SEQ ID NO.1-8所示的引物的含量各自為0.4-0.6μmol，分別由SEQ ID NO.11-14所示的探針的含量各自為0.1-0.3μmol。

3.根據權利要求1所述的核酸試劑，其中，所述核酸試劑還包括內標對照；

所述內標對照含有SEQ ID NO.9-10所示的引物和SEQ ID NO.15所示的探針，其中，分別由SEQ ID NO.9-10所示的引物的含量各自為0.2-0.4μmol，由SEQ ID NO.15所示的探針的含量為0.1-0.3μmol。

4.根據權利要求3所述的核酸試劑，其中，所述核酸試劑包括A管和B管；A管含有SEQ IDNO.1-4、9-10所示的引物和SEQ ID NO.11-12、15所示的探針；B管含有SEQ ID NO.5-8、9-10所示的引物和SEQ ID NO.13-14、15所示的探針。

5.根據權利要求4所述的核酸試劑，其中，SEQ ID NO.11和13所示的探針具有第一熒光標記；SEQ ID NO.12和14所示的探針具有第二熒光標記；SEQ ID NO.15所示的探針具有第三熒光標記；所述第一熒光標記、所述第二熒光標記和所述第三熒光標記各不相同，且各自獨立地選自FAM熒光標記、JOE熒光標記、CY5熒光標記、VIC熒光標記和ROX熒光標記中的一種。

6.根據權利要求1～5中任意一項所述的核酸試劑，其中，所述呼吸道感染病毒包括新型冠狀病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒中的至少一種。

7.一種用于檢測呼吸道感染病毒的試劑盒，該試劑盒含有權利要求1～6中任意一項所述的核酸試劑，并且可選地，所述試劑盒還含有反應體系緩沖液、逆轉錄酶、DNA聚合酶、陽性對照和水中的至少一種。

8.權利要求1～6中任意一項所述的核酸試劑在制備用于檢測呼吸道感染病毒的試劑盒中的用途。

9.一種用于檢測呼吸道感染病毒的系統，該系統包括具有A管檢測器和B管檢測器的PCR儀、計算裝置和輸出裝置；所述A管檢測器和B管檢測器分別為裝載有權利要求4～6中任意一項所述的核酸試劑的核酸試劑儲藏容器；所述PCR儀包括第一熒光通道、第二熒光通道和第三熒光通道；所述第一熒光通道、所述第二熒光通道和所述第三熒光通道各不相同，且各自獨立地選自FAM熒光通道、JOE熒光通道和CY5熒光通道中的一種；所述計算裝置包括存儲器和處理器，所述存儲器中存儲有計算機程序，所述處理器被配置為執行所述存儲器中存儲的計算機程序，以實現如下的判別：

若空白對照、陽性對照和內標對照成立，則檢測結果有效；

若熒光通道檢測到的擴增曲線呈S型，且CT值＜38，則判定檢測結果為陽性；若熒光通道檢測到的擴增曲線呈S型，且38≤CT值＜40，則重新提取樣本并復檢，若復檢得到的擴增曲線呈S型，且CT值＜40，則判定檢測結果為陽性，否則為陰性；

若A管第一熒光通道和第二熒光通道的檢測結果均為陽性，則判定樣品中含有新型冠狀病毒；若A管第三熒光通道的檢測結果為陽性，則判定樣本提取正常，檢測結果正常；

若B管第一熒光通道的檢測結果為陽性，則判定樣品中含有甲型流感病毒；若B管第二熒光通道的檢測結果為陽性，則判定樣品中含有乙型流感病毒；若B管第三熒光通道的檢測結果為陽性，則判定樣本提取正常，檢測結果正常。

10.一種用于檢測呼吸道感染病毒的方法，其中，該方法包括：采用權利要求4-6中任意一項所述的核酸試劑，對待測樣本的核酸序列進行PCR擴增；進行所述PCR擴增的PCR儀包括第一熒光通道、第二熒光通道和第三熒光通道；所述第一熒光通道、所述第二熒光通道和所述第三熒光通道各不相同，且各自獨立地選自FAM熒光通道、JOE熒光通道和CY5熒光通道中的一種；并且進行如下的判別：

若空白對照、陽性對照和內標對照成立，則檢測結果有效；

若熒光通道檢測到的擴增曲線呈S型，且CT值＜38，則判定檢測結果為陽性；若熒光通道檢測到的擴增曲線呈S型，且38≤CT值＜40，則重新提取樣本并復檢，若復檢得到的擴增曲線呈S型，且CT值＜40，則判定檢測結果為陽性，否則為陰性；

若A管第一熒光通道和第二熒光通道的檢測結果均為陽性，則判定樣品中含有新型冠狀病毒；若A管第三熒光通道的檢測結果為陽性，則判定樣本提取正常，檢測結果正常；

若B管第一熒光通道的檢測結果為陽性，則判定樣品中含有甲型流感病毒；若B管第二熒光通道的檢測結果為陽性，則判定樣品中含有乙型流感病毒；若B管第三熒光通道的檢測結果為陽性，則判定樣本提取正常，檢測結果正常。