[發明專利]吲哚-3-乙酸甲酯在鑒別中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜中的應用

有效

• 申請號: 202010197053.2
• 申請日: 2020-03-19
• 公開（公告）號: CN111398498B
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發明（設計）人: 周金慧;王欣然;李熠;陳蘭珍;楊術鵬;張金振;金玥;楊宇暉;趙文;王鵬;黃京平
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蜜蜂研究所
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 商秀玲

本發明屬于食品檢測領域，具體涉及吲哚?3?乙酸甲酯在鑒別中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜中的應用。本發明首次提出以內源性小分子非揮發性物質吲哚?3?乙酸甲酯作為中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜鑒別的特征標志物，并確定了中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜中吲哚?3?乙酸甲酯的含量范圍。同時，本發明進一步提供了中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的鑒別方法，該方法定量準確，穩定性強，便于操作和推廣，對于準確識別中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜有著重要意義，有利于促進蜂產品產業化發展，有利于養蜂行業健康和可持續發展。

技術領域

本發明涉及食品檢測領域，具體涉及吲哚-3-乙酸甲酯在鑒別中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜中的應用。

背景技術

蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，與自身分泌物結合后，經充分釀造而成的天然甜物質。來源于不同的蜜蜂種類、蜜源植物、產地、甚至采收和加工方法的差異均可導致蜂蜜中內源性活性組分的不同。意大利蜜蜂和中華蜜蜂是我國飼養的兩個主要蜜蜂品種，目前我國有900萬左右的蜂群，其中意大利蜜蜂為800萬群，中華蜜蜂的蜂群數量在100萬群左右。意蜂蜂蜜是從國外引進的意大利蜜蜂采集并釀造而成的，意蜂易飼養，繁殖快，蜂蜜產量高，能采集大面積蜜源。但是通常意蜂蜂蜜生產周期短,含水量大,夏季易發酸起沫變質,通常需要經過后期的加工程序才可食用。中華蜜蜂作為中國特有蜜蜂品種，其生產的蜂蜜深受國人喜愛，與意大利蜜蜂相比，春季采蜜時間早，秋季停止采蜜時間晚，行動敏捷，適應性強，而且能采集面積小的蜜源，適合山區飼養。所以中華蜜蜂多采集森林或山區的雜花花蜜充分釀制而成蜂蜜。由于其蜜色澤深、口味獨特、香甜味濃，含有多種能被人體直接吸收的微量元素，由于釀蜜周期長、蜜源稀少被譽為“蜜之珍品”。由于中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜在生產方式和品質上的差異，導致二者在價格上存在明顯差異，所以一些不法分子為了追求高額利潤用意蜂蜂蜜冒充或摻入中蜂蜂蜜中以次充好，給廣大的中蜂蜂農和相關的企業造成了嚴重的經濟損失，同時也制約了中蜂產業的健康發展。

近年來中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜鑒別技術的開發受到科研人員和相關蜂產品企業的廣泛關注，中國專利申請201610545277.1，專利201510999246.9和201910550683.0均報道了中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的識別技術，以上所述技術均依賴于蛋白質作為特征生物標志物進行鑒別，但是需要復雜的蛋白質提取、濃度測定、蛋白質電泳分離和條帶識別等復雜的樣品前處理過程和復雜的MALDI-TOF-TOF技術，不符合高效快速鑒別的發展趨勢。中國專利申請20180008004.2報道了基于蜂蠟烷烴進行中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜鑒別的方法，但作為揮發性成分會隨儲存時間的延長，其含量明顯下降。因此建立快速，準確且穩定鑒別中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的化學分析方法是十分必要的。近年來，小分子內源性物質憑借在基質中穩定存在，且提取測定簡便，被廣泛應用于食品真實性和溯源鑒別，但在中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜鑒別中尚無相關報道。

發明內容

為了解決上述問題，本發明通過液相色譜串聯高分辨質譜分別對大量的中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜樣品進行正模式全掃描分析，獲得樣品譜圖，對比不同中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的譜圖時發現，它們均存在穩定的特征差異區域，通過該特征差異區域一級二級質譜碎片(特征區域的一級二級質譜圖分別見圖2、圖3)，鑒定該物質為吲哚-3-乙酸甲酯(其化學結構參見圖7)。之后，本發明基于液相色譜串聯質譜(LC-QQQ)建立特征標志物定量分析方法，對大量真實樣品進行檢測，確定了中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜中吲哚-3-乙酸甲酯各自的閾值范圍，從而提出了一種新的根據內源性小分子物質鑒別中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的方法。

為了實現上述目的，本發明首先提出了吲哚-3-乙酸甲酯在鑒別中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜中的應用。

本發明發現吲哚-3-乙酸甲酯在中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜中的含量相對穩定，且含量差異明顯，可作為鑒別上述兩種蜂蜜的依據。

本發明進一步提出一種中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的鑒別方法，以吲哚-3-乙酸甲酯的含量為鑒別依據，鑒別中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜。