[發明專利]一種用于治療腦梗死的臍帶間充質干細胞注射液制備方法

在審

• 申請號: 202010196676.8
• 申請日: 2020-03-19
• 公開（公告）號: CN111346051A
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發明（設計）人: 張海心
• 申請（專利權）人: 瑞太干細胞中心（沈陽）有限公司
• 主分類號: A61K9/08
• 分類號: A61K9/08;A61K35/28;A61P9/10;C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.人臍帶間充質干細胞的培養方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將臍帶快速置于臍帶保存液中；

(2)將步驟(1)所述臍帶縱向剖開，剔除臍帶內的動靜脈血管，并將所得華通氏膠剪成組織勻漿塊，并用濾網過濾；

(3)將步驟(2)所得組織勻漿塊平鋪于細胞培養皿，置于細胞培養箱孵育；

(4)將步驟(3)培養皿中加入無血清培養基，置于細胞培養箱內培養；

(5)將步驟(4)培養皿中原有培養基棄去，更換為新鮮培養基；

(6)將步驟(5)中的細胞用胰酶進行消化，得到P0代細胞；

(7)將步驟(6)所得P0代細胞進行傳代，傳至P5-P10代時收獲細胞；

(8)對收獲的細胞進行鑒定及檢測；

(9)制備人臍帶間充質干細胞注射液。

2.根據權利要求1所述的人臍帶間充質干細胞的培養方法，其特征在于，步驟(1)所取用的臍帶是健康、足月、行剖宮產的初產婦在胎兒娩出后結扎的人臍帶；所述人臍帶保存液是1％青霉素鈉和1％硫酸鏈霉素的PBS溶液。

3.根據權利要求1所述的人臍帶間充質干細胞的培養方法，其特征在于，步驟(2)須剔除臍帶內的動靜脈血管；所述組織勻漿塊體積為1mm³左右；所述濾網為200目。

4.根據權利要求1所述的人臍帶間充質干細胞的培養方法，其特征在于，所述培養箱條件為3％-8％二氧化碳、溫度范圍36℃-39℃、濕度85％-100％；所述培養/孵育方式為靜置培養/孵育。

5.根據權利要求1所述的人臍帶間充質干細胞的培養方法，其特征在于，步驟(5)所述更換培養基時間為步驟(4)之后24-48小時。

6.根據權利要求1所述的人臍帶間充質干細胞的培養方法，其特征在于，步驟(6)所述胰酶消化操作為步驟(5)之后5-7天且/或培養皿中貼壁細胞鋪滿約60％-90％時進行。

7.根據權利要求1所述的人臍帶間充質干細胞的培養方法，其特征在于，步驟(6)所用胰酶為重組胰蛋白酶。

8.根據權利要求1所述的人臍帶間充質干細胞的培養方法，其特征在于，步驟(7)傳代時的比例為1:2到1:4之間；傳代時間為步驟(6)和/或上一代細胞培養皿中貼壁細胞鋪滿約60％-90％時進行。

9.根據權利要求1所述的人臍帶間充質干細胞的培養方法，其特征在于，步驟(8)所述細胞表面抗原鑒定合格標準為：CD90、CD73、CD105表達均大于95％，CD45、CD34、CD79a、CD14、HLA-DR表達均小于2％。

10.根據權利要求1所述的人臍帶間充質干細胞的培養方法，其特征在于，步驟(9)所得制劑含有以下組分：人臍帶間充質干細胞，細胞密度為0.5×10⁶/ml-5×10⁶/ml；步驟(8)所得人臍帶間充質干細胞培養上清液；人血白蛋白，體積分數5％-20％。