[發明專利]提供具有嵌合抗原受體(CAR)的個性化細胞的方法

在審

• 申請號: 202010196217.X
• 申請日: 2020-03-19
• 公開（公告）號: CN111718421A
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發明（設計）人: A.博西奧;O.哈特;D.埃卡特;C.赫貝爾
• 申請（專利權）人: 美天施生物科技有限兩合公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 初明明;李志強

本發明涉及提供細胞的方法，所述細胞包含對暴露在腫瘤細胞上的一種或多種靶抗原具有特異性的嵌合抗原受體(CAR)，其特征在于，提供包含腫瘤細胞和非腫瘤細胞的細胞樣品并重復以下步驟?使細胞組織與包含熒光部分和抗原識別部分的綴合物接觸?從細胞組織中去除未結合的綴合物，并通過由第一綴合物的熒光部分發射的熒光輻射檢測結合至所述綴合物的細胞?消除由所述綴合物的熒光部分發射的熒光其中綴合物包含熒光部分和識別不同抗原的抗原識別部分直到鑒定提供有識別不同抗原的抗原識別部分的至少兩種綴合物為止，其組合允許在腫瘤細胞和非腫瘤細胞之間進行區分，和提供具有所鑒定的至少兩個抗原識別部分作為嵌合抗原受體(CAR)的細胞。

技術領域

本發明涉及選擇暴露在個體的癌細胞上而不在健康細胞上的抗原以便提供具有合適的嵌合抗原受體(CAR)的細胞的方法。

背景技術

癌癥是涉及失調的細胞生長的一大類疾病。在癌癥中，細胞不受控制地分裂和生長，形成惡性腫瘤，并且入侵身體的附近部分。癌癥還可通過淋巴系統或血流擴散到身體更遠的部分。

嵌合抗原受體(CAR)技術對于癌癥的過繼性細胞免疫療法可提供有前景的方法。通常，CAR包含對腫瘤相關抗原(TAA)有特異性的抗體單鏈片段可變區(scFv)，其經由鉸鏈區和跨膜區偶聯至T細胞信號傳導分子的胞質結構域。

通過將嵌合抗原受體(CAR)引入T細胞(下文中稱為CAR T細胞)，將產生T細胞，其被定制為將腫瘤細胞識別為“非自身細胞”，并因此幫助免疫系統根除腫瘤細胞。例如，CART細胞可以接觸靶細胞的表面分子，其然后觸發CAR T細胞的活化并導致靶細胞的裂解。

然而，開發有效的CAR T細胞特別面臨以下問題：

i) 一(1)種表面分子有時特異性不足，它也可在非腫瘤細胞上表達(安全問題)

ii) 表面分子不在所有腫瘤細胞上表達，存活(逃脫)的腫瘤細胞導致復發

iii) 腫瘤細胞關閉表面分子的表達并逃脫治療

iv) 抗原的表達水平或單一結合物的親和力可能太低而不能允許有效的T細胞活化

iv) 腫瘤樣品內以及腫瘤樣品之間抗原表達的強異質性需要腫瘤標志物表達(動力學)的個性化分析，一些標志物甚至出現在來自相同類型的腫瘤的所有腫瘤細胞上或者不出現在來自相同類型的腫瘤的任何腫瘤細胞上。

解決上述問題的潛在方法是使用多于一種表面分子作為靶，即所謂的在給定細胞上檢測多于一種靶的“雙重CAR T細胞”。

迄今為止還沒有適當地建立“雙重CAR T細胞”方法，特別是鑒于以下事實：需要適當地命中腫瘤的多個靶的組合越復雜，該種組合將越不可能適合多于一個或幾個患者（需要治療的個性化）。此外，如果腫瘤在第一次治療后進一步生長，很可能必須尋找CAR的新組合以進一步根除腫瘤。

進一步地，為了對個體患者的腫瘤標志物表達進行個性化表型分析，CAR的組合和CAR T細胞需要在患者和適應癥規定的可接受的時間范圍內開發。在臨床實踐中，最佳的時間范圍將是幾周。

因此，基于CAR細胞的任何癌癥免疫療法的成功將依賴于快速和可靠地選擇相應腫瘤細胞特異性的抗原。

已經發現，一組獨特的細胞表面抗原在人類癌細胞上表達，但在非惡性細胞上不表達或以較低水平表達。這些抗原(也稱為“標志物”)可用于經由特異性結合標志物的配體來鑒定和/或標記和/或破壞這樣的癌細胞的逃脫機制和/或使之失能。

因此，本發明的目的是提供選擇癌細胞特異性抗原的方法，所述抗原不在健康組織上表達，以便工程改造隨后殺傷/裂解癌細胞而不攻擊非腫瘤細胞的細胞。

發明內容