[發(fā)明專利]一種檢測(cè)鼠傷寒沙門氏菌的試劑盒及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010196129.X
• 申請(qǐng)日: 2020-03-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111366727B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王娟;趙超;魏勝男
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/543;G01N21/78
• 代理公司: 長(zhǎng)春眾邦菁華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 22214
• 代理人: 李外

本發(fā)明提供一種檢測(cè)鼠傷寒沙門氏菌的試劑盒及其制備方法，屬于試劑盒領(lǐng)域。該試劑盒包括：沙門氏菌的apt?Fe₃O₄@Ag NPs納米探針、過(guò)氧化氫刻蝕劑、脲酶溶液和尿素/苯酚紅試紙。本發(fā)明還提供一種檢測(cè)鼠傷寒沙門氏菌的試劑盒的制備方法。本發(fā)明利用免疫磁珠與納米粒子復(fù)合結(jié)構(gòu)對(duì)鼠傷寒沙門氏菌檢測(cè)，利用酶抑制法通過(guò)試紙顯色,縮短了檢測(cè)時(shí)間,定量檢測(cè)時(shí)變異系數(shù)小，最低檢測(cè)濃度為21cfu·mL^?1,加標(biāo)回收率達(dá)到96.18％,靈敏度高,穩(wěn)定性好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于試劑盒領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)鼠傷寒沙門氏菌的試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium，S.typhimurium)是一種革蘭氏陰性腸道桿菌，是導(dǎo)致食源性疾病爆發(fā)的最常見(jiàn)病原體之一。沙門氏菌通常通過(guò)動(dòng)物糞便污染食品，如雞蛋、果蔬、肉類和牛奶等。沙門氏菌感染可引起典型的腸胃炎反應(yīng)，如腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐、發(fā)熱和其他腸胃炎癥狀。據(jù)報(bào)道，沙門氏菌引起的食物中毒仍然呈上升的趨勢(shì)。目前，該菌是雞蛋、肉類和牛奶等農(nóng)副產(chǎn)品的必檢致病菌。

當(dāng)前，我國(guó)沙門氏菌的傳統(tǒng)檢測(cè)方法以微生物培養(yǎng)法為主，全程需要3-5天，操作繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，已不能滿足人們對(duì)食品安全檢測(cè)快速簡(jiǎn)便的要求。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，推動(dòng)著檢測(cè)方法的不斷更新，越來(lái)越多的方法應(yīng)用于檢測(cè)沙門氏菌，如PCR技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)等。PCR技術(shù)可在短時(shí)間內(nèi)放大檢測(cè)信號(hào)，具有靈敏度高的特點(diǎn)，但是PCR的操作過(guò)程要求專業(yè)人員進(jìn)行而且易出現(xiàn)假陽(yáng)性。ELISA法是基于抗原抗體的特異性結(jié)合進(jìn)行檢測(cè)，無(wú)需大型儀器，但是耗時(shí)長(zhǎng)，靈敏度低。LAMP作為一種新興的檢測(cè)技術(shù)，具有費(fèi)用低，靈敏度和特異性高的優(yōu)點(diǎn)，但是LAMP需要選擇性增菌培養(yǎng)，所以并不適用于樣品的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。所以，非常必要開(kāi)發(fā)一種快速，靈敏度高，特異性強(qiáng)的檢測(cè)方法來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)食源性致病菌的監(jiān)控，以保障食品安全。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種檢測(cè)鼠傷寒沙門氏菌的試劑盒及其制備方法，該試劑盒基于適配體-Fe₃O₄@Ag納米探針與尿素/苯酚紅試紙，能夠快速、靈敏、簡(jiǎn)便地檢測(cè)沙門氏菌。

本發(fā)明首先提供一種檢測(cè)鼠傷寒沙門氏菌的試劑盒，包括：

沙門氏菌的apt-Fe₃O₄@Ag NPs納米探針、過(guò)氧化氫刻蝕劑、脲酶溶液和尿素/苯酚紅試紙。

本發(fā)明還提供一種檢測(cè)鼠傷寒沙門氏菌的試劑盒的制備方法，包括：

步驟一：Fe₃O₄納米粒子的制備

將FeCl₃·6H₂O、檸檬酸鈉和CH₃COONa·3H₂O在乙二醇中室溫磁攪拌至完全溶解，然后將所得均質(zhì)溶液轉(zhuǎn)移至反應(yīng)釜內(nèi),將反應(yīng)釜放置于烘箱中反應(yīng)，用永磁鐵從反應(yīng)溶液中分離黑褐色的固體物質(zhì)，清洗后得到具有超順磁性的Fe₃O₄納米粒子；

步驟二：Fe₃O₄@Ag磁性納米粒子的制備

將AgNO₃和聚乙烯吡咯烷酮k-30溶于聚乙二醇中，充分溶解后，加入步驟一制備的Fe₃O₄納米粒子分散其中進(jìn)行反應(yīng)，用永磁鐵從反應(yīng)溶液中分離褐色的固體物質(zhì)，清洗后得到Fe₃O₄@Ag磁性納米粒子；

步驟三：apt-Fe₃O₄@Ag NPs納米探針的制備