[發(fā)明專利]一種基于RAA-CRISPR-cas13a檢測(cè)HBV cccDNA的試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010195047.3
• 申請(qǐng)日: 2020-03-19
• 公開（公告）號(hào): CN113493855A
• 公開（公告）日: 2021-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張向穎;任鋒;李浩;周育森;田原;金榮華;段鐘平;陳德喜;李偉華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 何葉喧

1.一種核酸分子組合物，由引物F1、引物R1和特異crRNA組成；

引物F1為序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

引物R1為序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

特異crRNA為序列表的序列3所示的單鏈RNA分子。

2.一種用于檢測(cè)HBV cccDNA的試劑盒，包括權(quán)利要求1所述的核酸分子組合物。

3.如權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括不降解質(zhì)粒的ATP依賴的DNA酶。

4.如權(quán)利要求2或3所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括LwCas13a蛋白。

5.如權(quán)利要求2或3或4所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括用于RAA擴(kuò)增的試劑或試劑盒。

6.如權(quán)利要求2或3或4或5所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括記載有檢測(cè)方法的載體；所述檢測(cè)方法包括如下步驟：

(1)提取受試者肝臟組織的總DNA，然后進(jìn)行PSAD消化；

(2)取步驟(1)的產(chǎn)物溶液，作為模板溶液，采用引物F1和引物R1組成的引物對(duì)進(jìn)行RAA擴(kuò)增；

(3)取步驟(2)的產(chǎn)物溶液，進(jìn)行基于CRISPR-Cas13a系統(tǒng)的可視化檢測(cè)；所述CRISPR-Cas13a系統(tǒng)的crRNA為所述特異crRNA。

7.權(quán)利要求1所述核酸分子組合物在制備試劑盒中的應(yīng)用；所述試劑盒的用途為檢測(cè)HBV cccDNA。

8.組件1、組件2、組件3和組件4在在制備試劑盒中的應(yīng)用；所述試劑盒的用途為檢測(cè)HBV cccDNA；

所述組件1為權(quán)利要求1所述核酸分子組合物；

所述組件2為不降解質(zhì)粒的ATP依賴的DNA酶；

所述組件3為L(zhǎng)wCas13a蛋白；

所述組件4為用于RAA擴(kuò)增的試劑或試劑盒。

9.權(quán)利要求1所述核酸分子組合物在檢測(cè)HBV cccDNA中的應(yīng)用。

10.一種檢測(cè)HBV cccDNA的方法，包括如下步驟：

(1)提取受試者肝臟組織的總DNA，然后進(jìn)行PSAD消化；

(2)取步驟(1)的產(chǎn)物溶液，作為模板溶液，采用引物F1和引物R1組成的引物對(duì)進(jìn)行RAA擴(kuò)增；引物F1為序列表的序列1所示的單鏈DNA分子，引物R1為序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

(3)取步驟(2)的產(chǎn)物溶液，進(jìn)行基于CRISPR-Cas13a系統(tǒng)的可視化檢測(cè)；所述CRISPR-Cas13a系統(tǒng)中的crRNA如序列表的序列3所示。