[發(fā)明專利]用于紅斑狼瘡分型的AIM2+CD4+Trm細(xì)胞檢測試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010194618.1
• 申請日: 2020-03-19
• 公開（公告）號: CN111351946B
• 公開（公告）日: 2023-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陸前進(jìn);吳海競;趙志丹;朱歡;李倩文;廖威;趙明
• 申請（專利權(quán)）人: 中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 長沙市融智專利事務(wù)所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

1.使用AIM2⁺CD4⁺Trm細(xì)胞檢測試劑盒在非診斷目的的研究紅斑狼瘡分型和/或正常皮膚組織AIM2⁺CD4⁺Trm細(xì)胞特征中的應(yīng)用，其特征在于，所述的AIM2⁺CD4⁺Trm細(xì)胞檢測試劑盒包括利用原位標(biāo)記免疫染色檢測AIM2⁺CD4⁺Trm細(xì)胞數(shù)、AIM2⁺CD4⁺Trm細(xì)胞中AIM2表達(dá)量所需的試劑；包括抗原修復(fù)液、血清封閉劑、抗體稀釋劑、單克隆抗體組、洗滌劑、辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗、酪胺熒光染色劑及核染色劑；經(jīng)過所述的試劑盒檢測后將獲得的AIM2⁺CD4⁺Trm細(xì)胞在CD4⁺Trm細(xì)胞中的占比和AIM2⁺CD4⁺Trm細(xì)胞中AIM2表達(dá)量的結(jié)果用于輔助紅斑狼瘡診斷和/或分型診斷；所述的分型包括SLE、SCLE和DLE。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述抗原修復(fù)液為pH6.0的酸性抗原修復(fù)液；單克隆抗體染色順序，以及匹配的染料分別為：CD69抗體匹配Opal570染液、CD103抗體匹配Opal520染液、CD4抗體匹配Opal650染液、AIM2抗體匹配Opal690染液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，檢測時每種單克隆抗體染色順序、抗原修復(fù)條件、稀釋比范圍如下：染色第一輪：石蠟切片行酸性抗原修復(fù)液高壓修復(fù)后，血清封閉液封閉，CD69稀釋比1:200，室溫敷育，洗滌劑洗滌后，二抗室溫敷育，洗滌劑洗滌后，Opal570染色劑1:200稀釋，室溫敷育后，洗滌劑洗滌；染色第二輪：石蠟切片行酸性抗原修復(fù)液高壓修復(fù)后，血清封閉液封閉，CD103稀釋比1:200，室溫敷育，洗滌劑洗滌后，二抗室溫敷育，洗滌劑洗滌后，?Opal520染色劑1:100稀釋，室溫敷育后，洗滌劑洗滌；染色第三輪：石蠟切片行酸性抗原修復(fù)液高壓修復(fù)后，血清封閉液封閉，CD4稀釋比1:3，室溫敷育，洗滌劑洗滌后，二抗室溫敷育，洗滌劑洗滌后，Opal650染色劑1:200稀釋，室溫敷育后，洗滌劑洗滌；染色第四輪：石蠟切片行酸性抗原修復(fù)液高壓修復(fù)后，血清封閉液封閉，AIM2稀釋比1:2500，室溫敷育，洗滌劑洗滌后，二抗室溫敷育，洗滌劑洗滌后，?Opal690染色劑1:200稀釋，室溫敷育后，洗滌劑洗滌；向步驟4)所獲得的四重標(biāo)記染色的切片上滴加核染色劑，敷育，封片，用多光譜成像儀檢測。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，檢測時，具體的修復(fù)條件和各種敷育時間如下：

1）染色第一輪：石蠟切片行pH6.0酸性抗原修復(fù)液高壓1000W修復(fù)7分鐘后，二抗室溫敷育25min，Opal570染色劑稀釋后室溫敷育25min；

2）染色第二輪：石蠟切片行pH6.0酸性抗原修復(fù)液高壓1000W修復(fù)7分鐘后，二抗室溫敷育25min，Opal520染色劑稀釋后室溫敷育30min；

3）染色第三輪：石蠟切片行pH6.0酸性抗原修復(fù)液高壓1000W修復(fù)7分鐘后，二抗室溫敷育25min，Opal650染色劑稀釋后室溫敷育25min；

4）染色第四輪：石蠟切片行pH6.0酸性抗原修復(fù)液高壓1000W修復(fù)7分鐘后，二抗室溫敷育10min，Opal690染色劑稀釋后室溫敷育10min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，根據(jù)ROC曲線分析獲得具體的診斷和分型臨界值進(jìn)行判斷。