[發明專利]一種用于墨寶冬瓜雜交種子純度鑒定的SSR引物及其應用

有效

• 申請號: 202010190633.9
• 申請日: 2020-03-18
• 公開（公告）號: CN111286554B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 劉文睿;謝大森;江彪;王敏;閆晉強;彭慶務;何曉明;林毓娥;梁肇均;陳林
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院蔬菜研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 廣州知友專利商標代理有限公司 44104
• 代理人: 宣國華;劉艷麗

本發明公開了一種用于墨寶冬瓜雜交種子純度鑒定的SSR引物，包括引物SSR11c160的上游引物SSR11c160?F和下游引物SSR11c160?R，上游引物SSR11c160?F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物SSR11c160?R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。還公開了一種墨寶冬瓜雜交種子純度的鑒定方法，該引物能產生193bp的母本特異性標記和225bp的父本特異性標記，該引物重復性好、特異性強。該方法利用上述SSR引物，能準確、快速、有效的鑒定墨寶冬瓜雜交種子純度。還公開了上述引物在墨寶冬瓜雜交種子以及墨寶冬瓜雜交種子純度鑒定方面的應用。

技術領域

本發明屬于冬瓜雜交種子純度鑒定技術領域，具體涉及一種用于墨寶冬瓜雜交種子純度鑒定的SSR引物及其應用。

技術背景

種子純度是衡量種子質量的一項重要指標，影響作物的產量和產品質量。由于純度低而導致的減產完全有可能抵消一個新品種的增產潛力，種子純度低可為農業生產造成重大的損失。種子純度鑒定主要有常規鑒定、生化鑒定和分子標記鑒定等方法。

常規鑒定包括田間種植鑒定，籽粒和幼苗形態鑒定及物理化學鑒定，這些方法存在耗時長，易受環境因素影響，用地多，可用于鑒定的標記性狀少等缺點。

生化鑒定包括同工酶電泳、蛋白質電泳和高效液相色譜等方法，技術繁瑣復雜。

分子標記鑒定方法具有不受環境限制，類型豐富，數量多，多態性高，共顯性等優點。

常用的標記類型包括AFLP(擴增片段長度多態性)標記、RAPD(隨機引物擴增多態性)標記、SRAP(相關序列擴增多態性)標記、RFLP(限制性片段長度多態性)標記等。

其中SSR標記采用PCR擴增方法，僅需采集微量組織提取DNA，且對樣品DNA質量要求不高，樣品處理技術簡便；由于SSR標記呈共顯性遺傳，且多態性豐富，重復性好，結果穩定可靠，非常適合用于雜交種子純度檢測。

分子標記法在雜交種種子純度鑒定中應用越來越廣泛，有逐漸取代傳統的形態鑒定法的趨勢，目前已在水稻、黃瓜、南瓜、節瓜等作物雜交種純度鑒定中應用。

墨寶冬瓜是廣東省農業科學院蔬菜研究所育成的雜交一代小果型冬瓜品種。墨寶冬瓜具有瓜形美觀、肉質緊實、皮色墨綠等特點，深受農戶歡迎。

目前需探索一種可以快速準確且不受季節氣候限制的對該品種進行純度鑒定的方法。

發明內容

本發明的第一個目的在于提供一種用于墨寶冬瓜種子純度鑒定的SSR引物，該引物能產生母本特異性標記和父本特異性標記(即共顯性標記)，重復性好、特異性強。

本發明的目的還在于提供一種墨寶冬瓜種子純度的鑒定方法，該方法利用上述SSR引物，能準確、快速、便捷、有效的鑒定墨寶冬瓜種子純度。

本發明的第三個目的在于提供上述SSR引物在墨寶冬瓜雜交種子以及墨寶冬瓜雜交種子純度鑒定方面的應用。

本發明的上述第一個目的可以通過如下技術方案來實現：一種用于墨寶冬瓜種子純度鑒定的SSR引物，所述引物包括引物SSR11c160的上游引物SSR11c160-F和下游引物SSR11c160-R，其中上游引物SSR11c160-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的下游引物SSR11c160-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

引物SS327的上游引物SSR11c160-F和下游引物SSR11c160-R的具體核苷酸序列分別如下：

SSR11c160-F：5’-GCCCACACTCACCTTACACA-3’(SEQ ID NO.1)；

SSR11c160-R：5’-AGCCCCACCGAATTAATGCT-3’(SEQ ID NO.2)。