[發明專利]一種用于墨寶冬瓜雜交種子純度鑒定的SSR引物及其應用

有效

• 申請號: 202010190633.9
• 申請日: 2020-03-18
• 公開（公告）號: CN111286554B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 劉文睿;謝大森;江彪;王敏;閆晉強;彭慶務;何曉明;林毓娥;梁肇均;陳林
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院蔬菜研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 廣州知友專利商標代理有限公司 44104
• 代理人: 宣國華;劉艷麗

1.一種墨寶冬瓜雜交種子純度的鑒定方法，其特征是包括以下步驟：

（1）取冬瓜子葉，提取冬瓜基因組DNA；

（2）以冬瓜基因組DNA為模板，采用引物SSR11c160進行PCR擴增，得擴增產物，其中所述引物包括引物SSR11c160的上游引物SSR11c160-F和下游引物SSR11c160-R，其中所述上游引物SSR11c160-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物SSR11c160-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

（3）將擴增產物利用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測；

（4）對電泳結果進行分析，引物SSR11c160能產生193bp的母本特異性標記SSR11c160₁₉₃以及225bp的父本特異性標記SSR11c160₂₂₅，同時具有母本和父本兩種親本特異性條帶的單株為真正的雜交種，缺少其中任意一條條帶的為假雜種，然后根據電泳結果計算種子的純度。

2.根據權利要求1所述的墨寶冬瓜雜交種子純度的鑒定方法，其特征是：步驟（2）中PCR擴增時，采用的反應體系包括：濃度為200ng·μL^-1的冬瓜基因組DNA 1μL，含Mg²⁺的10×PCRbuffer 2μL，2.5mM的dNTPs 1.5μL，濃度為10 mM的上游引物SSR11c160-F 1μL，濃度為10mM的下游引物SSR11c160-R 1μL，濃度為2U/μL的 Taq酶 1μL，ddH₂O補足至20μL。

3.根據權利要求1所述的墨寶冬瓜雜交種子純度的鑒定方法，其特征是：步驟（2）中PCR擴增時，擴增程序為：95℃預變性3min后，94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，35個循環后，72℃終延伸7min，置于4℃保存。

4.根據權利要求1所述的墨寶雜交種子純度的鑒定方法，其特征是：步驟（3）中聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測時采用質量百分含量為8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳。

5.用于墨寶冬瓜雜交種子純度鑒定的SSR引物在墨寶冬瓜雜交種子以及墨寶冬瓜雜交種子純度鑒定方面的應用，其中所 述引物包括引物SSR11c160的上游引物SSR11c160-F和下游引物SSR11c160-R，其中所述上游引物SSR11c160-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物SSR11c160-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。