[發明專利]一種含有CLCN2純合突變的白質腦病患者特異誘導多能干細胞系

在審

• 申請號: 202010187150.3
• 申請日: 2020-03-17
• 公開（公告）號: CN111440771A
• 公開（公告）日: 2020-07-24
• 發明（設計）人: 彭福華;鐘秀風;陳灼林
• 申請（專利權）人: 中山大學附屬第三醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/85;C12N15/12
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

1.一種含有CLCN2純合突變(c.2257CT)的白質腦病患者特異誘導多能干細胞，其特征在于，

收集CLCN2基因突變患者的尿液，分離和培養尿液細胞，尿液細胞重編程為誘導多能干細胞，獲得含有CLCN2純合突變(c.2257CT)的白質腦病患者特異誘導多能干細胞系；所述的CLCN2基因突變患者是CLCN2基因的第2257位堿基由C突變為T，為純合突變。

2.根據權利要求1所述的白質腦病患者特異誘導多能干細胞，其特征在于，所述的尿液細胞重編程為誘導多能干細胞是在尿液細胞中電轉入包含有OCT4,SOX2,SV40LT和KLF4基因的非整合質粒和包含有miR-302b,c,a,d and miR-367的質粒，再經培養獲得含有CLCN2純合突變(c.2257CT)的白質腦病患者特異誘導多能干細胞系。

3.根據權利要求1所述的白質腦病患者特異誘導多能干細胞，其特征在于，所述的分離和培養尿液細胞是尿液收集后進行離心，細胞沉淀用含有抗生素的PBS洗滌，重懸于原代培養基中，重懸的細胞接種到L-gelatin包被的六孔板中，細胞密度長到80-90％，進行消化傳代，獲得尿液細胞，所述的原代培養基為DMEM/Ham’s F-12nutrient mix(1:1)+10％FBS(血清)+1x Renal epithelial cell growth medium補劑+1x雙抗。

4.根據權利要求3所述的白質腦病患者特異誘導多能干細胞，其特征在于，所述的進行消化傳代是用0.25％TrypLE express進行消化傳代。

5.根據權利要求1所述的白質腦病患者特異誘導多能干細胞，其特征在于，所述的尿液細胞重編程為誘導多能干細胞是將尿液細胞進行原代和傳代培養，通過電轉法將質粒pEP4EO2SET2K和pCEP4-miR-302-367轉入尿液細胞中，誘導并挑取形態類似胚胎干細胞的克隆進行傳代培養，擴增獲得含有CLCN2純合突變(c.2257CT)的白質腦病患者特異誘導多能干細胞系。

6.根據權利要求5所述的白質腦病患者特異誘導多能干細胞，其特征在于，所述的再經消化后，進行傳代、擴增是當細胞密度達到約80％，用0.5mM的EDTA消化，傳代，擴增。