[發明專利]一種含有CLCN2純合突變的白質腦病患者特異誘導多能干細胞系

在審

• 申請號: 202010187150.3
• 申請日: 2020-03-17
• 公開（公告）號: CN111440771A
• 公開（公告）日: 2020-07-24
• 發明（設計）人: 彭福華;鐘秀風;陳灼林
• 申請（專利權）人: 中山大學附屬第三醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/85;C12N15/12
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

本發明公開了一種含有CLCN2純合突變(c.2257CT)的白質腦病患者特異誘導多能干細胞系。收集CLCN2基因突變患者的尿液，分離和培養尿液細胞，尿液細胞重編程為誘導多能干細胞，獲得含有CLCN2純合突變(C.2257CT)的白質腦病患者特異誘導多能干細胞系。該誘導多能干細胞的STR與CLCN2患者的相同，表達多潛能分子標簽，體內具有形成畸胎瘤能力，可為CLCN2突變相關疾病的發病機制及治療研究提供新的生物材料和細胞模型工具。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種含有CLCN2純合突變(c.2257CT)的白質腦病患者特異誘導多能干細胞系極其構建方法。

背景技術

CLCN2基因是編碼氯離子通道2(Chloride Channel 2,ClC-2)蛋白的基因。ClC-2在人體中分布廣泛，尤其在大腦中表達較高，其在調節水電解質平衡中發揮重要作用[1]。ClC-2在多個器官和組織中發揮功能[2]，其中CLCN2相關白質腦病(CLCN2-relatedleukoencephalopathy,CC2L)是由CLCN2基因突變進而導致ClC-2功能障礙而引起的常染色體隱性遺傳病。CC2L患者常表現有視網膜脈絡膜病變或視神經萎縮、男性不育、小腦性共濟失調、認知障礙、學習障礙等，顱腦MRI通常提示髓鞘空泡變性[3-5]。

在中樞神經系統中，ClC-2主要分布在少突膠質細胞周圍的縫隙連接處、海馬的錐體神經元中以及血管周圍基底的星形膠質細胞末端[1]。有學者認為，ClC-2在神經活動后會通過星形膠質細胞合胞體重吸收Cl-以維持神經元的興奮性[6]。關于CC2L，目前僅有少量的病例報道，且由于尚無合適的疾病模型，其致病機制尚不明確，目前也無有效的治療手段。因此，創建用于研究CLCN2基因相關疾病的體外細胞模型是很有必要的。

隨著體細胞重編程技術的發展，獲取患者特異的誘導多能干細胞(inducedpluripotent stem cells,iPSCs)成為現實[7]。研究表明，iPSCs具有向機體幾乎所有細胞分化的能力，不僅可構建多種體外細胞模型進行疾病機制的研究以及藥物篩查[8]，還由于其具有患者特異性，可減少免疫排斥的優勢，可用于替代移植治療[9,10]。

因此，構建含有CLCN2突變的白質腦病患者特異誘導多能干細胞系，可以為CLCN2突變相關疾病的發病機制及治療研究提供新的生物材料。

參考文獻：

1、Depienne C,Bugiani M,Dupuits Cetal.Brain white matter oedema due toClC-2chloride channel deficiency:an observational analytical study[J].LancetNeurol,2013,12(7):659-668.

2、Brennan S C,Wilkinson W J,Tseng Hetal.The extracellular calcium-sensing receptor regulates human fetal lung development via CFTR[J].Scientific Reports,2016,6(1).

3、van der Knaap M S,Depienne C,Sedel Fetal.CLCN2-RelatedLeukoencephalopathy[J].2015.

4、Blanz J,Schweizer M,Auberson Metal.Leukoencephalopathy uponDisruption of the Chloride Channel ClC-2[J].Journal of Neuroscience,2007,27(24):6581-6589.