[發明專利]活性提高的磷酸轉酮酶及在生產代謝物中的應用

有效

• 申請號: 202010186134.2
• 申請日: 2019-04-30
• 公開（公告）號: CN111411093B
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發明（設計）人: 孫際賓;李慶剛;鄭平;周文娟;張曉立;德萊奧西班喬·泰沃;馬延和
• 申請（專利權）人: 中國科學院天津工業生物技術研究所
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C07K19/00;C12P21/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 何葉喧

1.突變體蛋白，為如下(d1)、(d2)、(d3)或(d4)：

(d1)將磷酸轉酮酶進行如下突變得到的蛋白質：對應于序列3的第260位氨基酸殘基由H突變為Y；

(d2)將磷酸轉酮酶進行如下兩個突變得到的蛋白質：對應于序列3的第260位氨基酸殘基由H突變為Y；對應于序列3的第2位氨基酸殘基由T突變為A；

(d3)將磷酸轉酮酶進行如下兩個突變得到的蛋白質：對應于序列3的第260位氨基酸殘基由H突變為Y；對應于序列3的第6位氨基酸殘基由I突變為T；

(d4)將磷酸轉酮酶進行如下三個突變得到的蛋白質：對應于序列3的第260位氨基酸殘基由H突變為Y；對應于序列3的第2位氨基酸殘基由T突變為A；對應于序列3的第6位氨基酸殘基由I突變為T。

2.一種融合蛋白，為將權利要求1所述突變體蛋白與蛋白標簽融合得到的蛋白質。

3.編碼權利要求1中所述突變體蛋白的多核苷酸或編碼權利要求2所述融合蛋白的多核苷酸。

4.具有權利要求3所述多核苷酸的表達盒、重組載體、重組微生物或離體的重組細胞。

5.特定物質在制備代謝物中的應用；

所述特定物質為：權利要求1中所述的突變體蛋白，或，權利要求2中所述融合蛋白，或，權利要求3所述的多核苷酸，或，權利要求4所述表達盒，或，權利要求4所述重組載體，或，權利要求4所述重組微生物，或，權利要求4所述離體的重組細胞；

所述代謝物為源自乙酰輔酶A的代謝物。

6.一種提高磷酸轉酮酶酶活的方法，包括如下步驟：

將磷酸轉酮酶進行如下突變：

對應于序列3的第260位氨基酸殘基由H突變為Y。

7.一種提高磷酸轉酮酶酶活的方法，包括如下步驟：

將磷酸轉酮酶進行兩個如下突變：

對應于序列3的第260位氨基酸殘基由H突變為Y；

對應于序列3的第2位氨基酸殘基由T突變為A。

8.一種提高磷酸轉酮酶酶活的方法，包括如下步驟：

將磷酸轉酮酶進行如下兩個突變：

對應于序列3的第260位氨基酸殘基由H突變為Y；

對應于序列3的第6位氨基酸殘基由I突變為T。

9.一種提高磷酸轉酮酶酶活的方法，包括如下步驟：

將磷酸轉酮酶進行如下三個突變：

對應于序列3的第260位氨基酸殘基由H突變為Y；

對應于序列3的第2位氨基酸殘基由T突變為A；

對應于序列3的第6位氨基酸殘基由I突變為T。

10.一種制備代謝物的方法，包括如下步驟：通過培養權利要求4所述的重組微生物制備代謝物；所述代謝物為源自乙酰輔酶A的代謝物。