[發(fā)明專(zhuān)利]一種高耐鎘菌株及其分離篩選方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010185252.1
• 申請(qǐng)日: 2020-03-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111925950A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李文;王陶;陳銀元
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 徐州工程學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/16
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/16;C12N1/02;C12R1/645
• 代理公司: 合肥律眾知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34147
• 代理人: 鄧盛花

本發(fā)明涉及土壤修復(fù)技術(shù)領(lǐng)域，具體是公開(kāi)了一種高耐鎘菌株及其分離篩選方法，所述菌株于2018年05月28日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心(GDMCC)，菌種保藏號(hào)為GDMCC No：60378，其26S rDNA序列是序列表SEQ NO.1所示。本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，由重金屬污染的土壤中分離出高耐鎘菌株，其耐受鎘的性能相對(duì)于現(xiàn)有的文獻(xiàn)報(bào)道更佳，并且本發(fā)明中高耐鎘菌株的分離篩選方法對(duì)儀器要求低，操作簡(jiǎn)單，安全快捷。本發(fā)明的高耐鎘菌株對(duì)受重金屬污染的土壤和水體修復(fù)具有重要的意義，具備重大的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及土壤修復(fù)技術(shù)領(lǐng)域，具體屬于一種高耐鎘菌株及其分離篩選方法。

背景技術(shù)

我國(guó)部分地區(qū)土壤環(huán)境污染較為嚴(yán)重，土壤污染通常以某一種污染物為主，并同時(shí)存在著其他污染物，即復(fù)合污染問(wèn)題。據(jù)報(bào)道，目前我國(guó)受 Cd、As、Cr、Pb等重金屬污染的耕地面積近2500萬(wàn)hm，約占總耕地面積的1/5。其中鎘污染為主的鎘-鉛復(fù)合污染嚴(yán)重危害了我國(guó)湖南等主要糧食產(chǎn)地的糧食產(chǎn)量和質(zhì)量安全，因此，土壤鎘污染己成為一個(gè)重要的環(huán)境問(wèn)題，對(duì)人體健康和國(guó)家糧食安全造成嚴(yán)重威脅。同時(shí)，水體重金屬污染也日趨嚴(yán)重，某些流域中污染物鎘的超標(biāo)率高達(dá)64％。

生物修復(fù)被認(rèn)為是一種來(lái)源廣泛、處理費(fèi)用低、無(wú)污染且修復(fù)效率高的方法，特別是微生物修復(fù)技術(shù)越來(lái)越受到學(xué)者的青睞。

修復(fù)重金屬污染的微生物主要是土著真菌和細(xì)菌，不同微生物對(duì)重金屬污染的耐性也不同，通常為真菌細(xì)菌放線(xiàn)菌。污染土壤中的土著微生物往往具有較高的重金屬抗性，從中分離的微生物由于適應(yīng)當(dāng)?shù)氐淖匀画h(huán)境，所以能有效修復(fù)重金屬污染。但是目前還沒(méi)有報(bào)道有很好重金屬抗性的菌株，所以尋找一種高重金屬抗性的菌株，就對(duì)土壤和水體修復(fù)和環(huán)境保護(hù)具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供了一種高耐鎘菌株及其分離篩選方法，克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，在受污染的土壤中分離純化出一種高耐鎘的菌株。

為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案如下：

一種高耐鎘菌株，所述菌株于2018年05月28日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心(GDMCC)，菌種保藏號(hào)為GDMCC No：60378，其26S rDNA 序列是序列表SEQ NO.1所示。

進(jìn)一步，所述菌株在固體培養(yǎng)基中最大耐受鎘的濃度為22000mg/L，液體培養(yǎng)基中最大耐受鎘的濃度為18000mg/L。

一種高耐鎘菌株的分離篩選方法，包括以下具體步驟：

(1)菌株的分離純化，選取多種重金屬污染土壤樣品制成土壤懸液，取上清液均勻涂布到含100mg/L氯化鎘的固體純化培養(yǎng)基分別挑取單個(gè)菌落，采用平板劃線(xiàn)分離法將菌落分別種到鎘濃度為100、150、200mg/L的固體培養(yǎng)基中將耐鎘能力最強(qiáng)的菌落選出，對(duì)其單菌落連續(xù)4次采用平板劃線(xiàn)分離法進(jìn)行純化；

(2)高耐鎘菌株的篩選，將純化所得菌株依次接種到含鎘濃度分別為 250-24000mg/L的系列濃度梯度的同種篩選培養(yǎng)基上，室溫下進(jìn)行培養(yǎng)，挑選出抗高濃度鎘的菌株，得到本發(fā)明的高耐鎘菌株，其編號(hào)為QN-3。

進(jìn)一步，所述土壤懸液的具體制備步驟為：將土壤樣品與無(wú)菌水按照 1:10的重量比進(jìn)行混合，在室溫條件下150r/min振蕩30min后靜置10min。

進(jìn)一步，所述固體純化培養(yǎng)基包括以下組分：葡萄糖15g，酵母提取物 5g，選礦黑藥2g，選礦黃藥4g，七水硫酸鎂3mL，硫酸銨2mL，氯化鉀4mL，硫酸錳0.3g，瓊脂20g，溴酚藍(lán)6mL。