[發明專利]一種快速定量檢測全血中sST2的微流控熒光免疫芯片

在審

• 申請號: 202010184111.8
• 申請日: 2020-03-17
• 公開（公告）號: CN111308098A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 王鵬;郭聞軒
• 申請（專利權）人: 北京利德曼生化股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N21/64
• 代理公司: 天津翰林知識產權代理事務所(普通合伙) 12210
• 代理人: 付長杰

本發明公開了一種快速定量檢測全血中sST2的微流控熒光免疫芯片，屬于免疫分析領域。該芯片包括示蹤試劑包括花菁染料Cy5標記的sST2單克隆抗體和質控物；所述捕獲試劑含有sST2單克隆抗體和質控物單克隆抗體。該芯片通過示蹤抗體標記血液中的sST2抗原，形成免疫復合物，被捕捉抗體捕捉，在激發光的激發下發光。具有較高的靈敏度、特異性和較寬的檢測范圍，能夠用來評價患者sST2水平，提示心衰狀態。

技術領域

本發明涉及免疫分析領域，具體涉及一種快速定量檢測全血中sST2的微流控熒光免疫芯片。

背景技術

生長刺激表達基因2蛋白(ST2)是白介素1(IL-1)受體家族的一員。ST2蛋白有2種類型，第一種是可溶形式(稱為可溶性ST2或sST2)，另一種是與細胞膜結合的形式，稱為ST2受體或ST2L。ST2的配體是白介素-33(IL-33)。生理上，IL-33與ST2受體結合是心肌疾病或損傷后的應對措施，可下調心臟功能。IL-33這種心臟保護性信號可以被可溶性ST2信號抵消，機理是可溶性ST2與IL-33結合，阻止其與ST2受體的結合，也就不能傳遞心臟保護性信號。因此，在有高濃度可溶性ST2時，心臟的負荷壓力更大。已知ST2濃度與心衰嚴重程度有關，當ST2濃度高于35.0ng/mL閾值時提示預后不良的風險較高。對于心電圖ST抬高的心梗(STEMI)患者或沒有ST抬高的急性冠脈綜合征(NSTE-ACS)患者，ST2升高都強烈預示可能發生死亡或心臟衰竭。急性冠脈綜合征患者，如果ST2水平高于35.0ng/mL，發展為心衰的風險明顯高于那些ST2濃度低于該閾值患者。ST2參與心肌重建過程，還可用以輔助判別病人對于依普利酮(Eplerenone)等抗心肌纖維化藥物的治療效果。

國內已申請專利的檢測技術包括酶聯免疫吸附(ELISA)法(公開號CN 106556705A、CN 106620692 A)、膠體金免疫層析法(公開號CN 204514934 U)、和熒光免疫層析法(公開號CN 104865387 A)，化學發光(CLIA)法(公開號CN 107966432 A)。膠體金免疫層析法，操作簡單，但靈敏度、線性、重復性和定量準確性較差。熒光免疫層析法靈敏度高與膠體金法，但仍低于ELISA法和CLIA法，同時重復性、準確性和線性范圍較差。同樣存在靈敏度和線性范圍較差的特點。ELISA法技術成熟，靈敏度較高，檢測費用較低，但重復性和線性范圍較差，批間差大，操作復雜，檢測時間長。CLIA法在靈敏度、重復性、線性范圍、準確性等分析性能方面均優于各方法，但需要大型檢測儀器，檢測時間較長，使用場景受限制。

因此，對于心衰預測和預后標志物sST2，迫切需要找到一種既能夠降低操作難度、減少檢測時間，又能夠保證較高檢測靈敏度、準確度和重復性的檢測方法。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提出一種快速定量檢測全血中sST2的微流控熒光免疫芯片，該芯片通過與ResponseIQ聯用，大大降低了操作難度和檢測時間，有效提高了sST2檢測的靈敏度、準確度和重復性。

基于上述目的，本發明提供的一種快速定量檢測全血中sST2的微流控熒光免疫芯片，包括中心板和底板，所述中心板和所述底板圍繞此凹部彼此相疊的區域通過激光焊接來直接地并且以流體密封方式彼此結合，樣本流道與所述測量格呈流體接觸并且在所述樣本流道上設有用于溶解示蹤試劑的示蹤區、兩個樣本混合區域、液體檢測監控區域、樣本流道端部有樣本廢料區域，在測量格對應位置的中心板上設置捕獲區；其特征在于，

所述芯片示蹤區預先封裝示蹤試劑，所述示蹤試劑包括用熒光激發波長為610-660nm的熒光染料標記的sST2單克隆抗體和用熒光激發波長為610-660nm的熒光染料標記的質控物；

所述捕獲試劑包括sST2單克隆抗體和質控物單克隆抗體。