[發明專利]一種用于表達LA16C-313D11.11的序列及其構建體和構建方法與應用

在審

• 申請號: 202010184078.9
• 申請日: 2020-03-16
• 公開（公告）號: CN111454957A
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 辛衛娟
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬婦產科醫院
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/70;C12N15/66;A61K48/00;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 天津市尚儀知識產權代理事務所(普通合伙) 12217
• 代理人: 王山

本發明提供了一種表達LA16C?313D11.11的序列，該序列為SEQ ID NO.1所示。本發明還提供了一種構建體，該構建體包括質粒載體EcoRI和BamHI限制性上下游酶切位點之間的如SEQ ID NO.1所示DNA序列，構建體序列為SEQ ID NO.2所示。此外本發明還提供了該構建體的制備方法：A、目的基因片段的獲得；B、線性化表達載體的制備；C、目的基因構建入線性化表達載體中；D、DH5α感受態細胞的制備和轉化；E、菌落PCR鑒定陽性轉化子；F、陽性克隆送測序。以及該構建體在抑制子宮內膜癌細胞中的應用。本發明的用于表達LA16C?313D11.11的序列及其構建體能夠有效下調子宮內膜癌細胞的存活、遷移和侵襲能力，具有抑制子宮內膜癌細胞的作用。

技術領域

本發明涉及生物學和基因工程的技術領域，具體說是一種用于表達LA16C-313D11.11的序列及其構建體和構建方法與應用。

背景技術

子宮內膜癌是一組子宮內膜上皮源型的惡性腫瘤，是女性生殖系統最常見的惡性腫瘤之一，占女性生殖道惡性腫瘤的20％～30％，近年來在全世界范圍內，子宮內膜癌的發病率有所上升且有年輕化的趨勢。在我國，子宮內膜癌的發病率僅次于宮頸癌，居第二位，而在歐美等發達國家，其發病率高居女性生殖道惡性腫瘤的首位。目前子宮內膜癌的發病機制尚不明確，多認為發病與高雌激素刺激和無孕激素拮抗有關。根據病因、組織學及生物學特性的不同，子宮內膜癌可分為以下兩個亞類：I型子宮內膜癌為雌激素依賴型，是臨床最常見的類型，占子宮內膜癌的80％-90％。其組織類型多為子宮內膜腺癌(75％-80％)，II型子宮內膜癌為非雌激素依賴型，占子宮內膜癌患者的10％-15％，其組織類型多為漿液性乳頭狀腺癌，少部分為透明細胞癌，細胞分化較差，惡性度高。子宮內膜癌首選手術治療，在手術病例分期的基礎上，輔助以放、化療和激素治療，但治療效果并不理想。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種用于表達LA16C-313D11.11的序列及其構建體和構建方法與應用。

本發明為解決公知技術中存在的技術問題所采取的技術方案是:

本發明的用于表達LA16C-313D11.11的序列，該序列為SEQ ID NO.1所示。

本發明的構建體，包括質粒載體EcoRI和BamHI限制性上下游酶切位點之間的如SEQ ID NO.1所示DNA序列，構建體序列為SEQ ID NO.2所示。

LA16C-313D11.11的過表達質粒為：

pLenti-EF1a-EGFP-F2A-Puro-CMV-LncRNA(LA16C-313D11.11)。

所述的質粒載體為H145。

本發明的構建體的構建方法，包括：

A、目的基因片段的獲得，通過PCR進行擴增方式或通過酶切方式得到目的基因；

其中通過PCR進行擴增得到目的基因的方式中，使用高保真的PrimeSTAR酶擴增目的基因，反應體系和條件如下：

按下列組分配制PCR反應液：

PCR反應條件設置如下：

PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增效果，并把目的基因條帶從瓊脂糖凝膠電泳后的膠中割下來，用TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.3.0做膠回收；

通過酶切得到目的基因的方式中：