[發明專利]一種茖蔥體細胞再生植株的方法

在審

• 申請號: 202010181906.3
• 申請日: 2020-03-16
• 公開（公告）號: CN111264390A
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發明（設計）人: 唐曉杰;程廣有
• 申請（專利權）人: 北華大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京盛凡智榮知識產權代理有限公司 11616
• 代理人: 屠佳婕

1.一種茖蔥體細胞再生植株的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1外植體：鱗莖。取茖蔥鱗莖，洗凈，切成1cm方塊，備用；

S2培養基：MS基本培養基，添加不同種類和用量生長調節劑，配制成茖蔥初級、繼代和生根培養基；

初級培養：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+2,4-D 0.2mg/L；

繼代培養：MS+6-BA1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+2,4-D 0.2mg/L；

不定根誘導：1/2MS+IBA0.5mg/L；

培養基pH值5.5-6.0，蔗糖20g·L-1，常規方法滅菌；

S3接種與培養：

(1)接種：用自來水沖洗鱗莖，再用洗潔精加自來水溶液搓洗鱗莖表面之后，用自來水沖去洗潔精溶液，把清洗好的寒蔥鱗莖在無菌室內放入滅菌好的燒杯里，倒入0.1％氯化汞表面消毒液浸泡8min，最后用無菌水沖洗鱗莖表面5遍，把沖洗好的寒蔥鱗莖在無菌狀態下接種在MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L培養基上，接種后放在培養室內培養，溫度23～25℃，光照強度3300～3500lux，光照時間12h；

(2)初級培養：將鱗莖萌發出的葉片切割下來接種在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+2,4-D 0.2mg/L培養上；

(3)繼代培養：培養基MS+6-BA1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+2,4-D 0.2mg/L上，繼代周期40天；

(4)不定根誘導：把生長健壯的個體苗接種在1/2MS+IBA0.5mg/L培養基上，經過25-35天時間的培養開始生根，根系強壯，有3-6條，根系長0.8-1.2cm，葉片高7-10cm。

(5)試管苗移栽：把生長發育生根完整的個體苗在培養室內打開瓶蓋24小時后，取出試管苗，洗凈根部黏附的培養基，在800倍多菌靈水溶液中藥浴，栽種在腐殖土+壤土1∶1的基質上，練苗期間溫度控制在22±2℃；練苗初期相對濕度80-90％，以后逐漸降低空氣相對濕度；每隔5天噴施一次殺菌劑，防止幼苗感染雜菌，在溫室內馴化培養3-4周，即可以自然生長，成活率90％以上。