[發明專利]同溫層芽孢桿菌高密度工業發酵培養基及其發酵方法

在審

• 申請號: 202010181763.6
• 申請日: 2020-03-16
• 公開（公告）號: CN111187744A
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 趙晶;張瑞振
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/07
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應森

1.高密度工業發酵培養基，其特征在于其原料按質量百分比的組成為：酵母粉0.4％～0.7％、豆粕粉2％～5％、葡萄糖1％～4％、玉米淀粉1％～4％、玉米蛋白粉0.3％～0.6％、NaCl 0.3％～0.6％、MgSO₄0.3％～0.6％、Na₂HPO₄ 0.3％～0.6％、(NH₄)₂SO₄ 0.4％～0.8％、K₂HPO₄0.04％～0.1％、MnSO₄ 0.04％～0.07％、NH₄Cl 0.1％～0.3％，pH值8.0～9.0。

2.同溫層芽孢桿菌高密度工業發酵方法，其特征在于包括以下步驟：

1)將保存于-80℃的同溫層芽孢桿菌Bacillus stratosphericus A3440接種于2216E瓊脂培養基上，經25～30℃恒溫培養36～48h活化；

2)將活化好的同溫層芽孢桿菌單菌落接種于裝有已經消毒滅菌的種子培養基的容器中，再將容器置于恒溫搖床培養，得到一級種子液；

3)將一級種子液接種至裝有已經消毒滅菌的如權利要求1所述高密度工業發酵培養基的種子罐中，設置各發酵參數進行發酵，發酵36～48h后結束發酵，得到二級種子液；

4)將二級種子液接種至裝有已經消毒滅菌的如權利要求1所述高密度工業發酵培養基的發酵罐中，設置各發酵參數進行發酵，發酵36～48h后結束發酵。

3.如權利要求2所述同溫層芽孢桿菌高密度工業發酵方法，其特征在于在步驟1)中，所述活化是活化2次。

4.如權利要求2所述同溫層芽孢桿菌高密度工業發酵方法，其特征在于在步驟2)中，所述接種的接種量為3％～6％。

5.如權利要求2所述同溫層芽孢桿菌高密度工業發酵方法，其特征在于在步驟2)中，所述種子培養基原料配方按質量百分比為：蛋白胨0.7％、酵母粉0.7％、NaCl 0.5％、MgSO₄0.4％、Na₂HPO₄ 0.5％、(NH₄)₂SO₄ 0.4％。

6.如權利要求2所述同溫層芽孢桿菌高密度工業發酵方法，其特征在于在步驟2)中，所述恒溫搖床培養的條件為：恒溫搖床180～200rpm，25～30℃培養36～48h。

7.如權利要求2所述同溫層芽孢桿菌高密度工業發酵方法，其特征在于在步驟3)中，所述一級種子液的裝液量為罐體積的60％～70％。

8.如權利要求2所述同溫層芽孢桿菌高密度工業發酵方法，其特征在于在步驟4)中，所述發酵培養基的滅菌條件為115～121℃下消毒滅菌30min。

9.如權利要求2所述同溫層芽孢桿菌高密度工業發酵方法，其特征在于在步驟4)中，所述發酵罐采用100～1000L發酵罐；所述發酵培養基的裝液量為罐體積的60％～70％。

10.如權利要求2所述同溫層芽孢桿菌高密度工業發酵方法，其特征在于在步驟4)中，所述發酵參數為：通氣量0.8～1.2(V/V·min)、罐壓0.1～0.2MP、攪拌轉速180～400rpm，發酵的溫度25～30℃，發酵的時間為36～48h。