[發明專利]一種測定細胞增殖速率的方法

在審

• 申請號: 202010181603.1
• 申請日: 2020-03-16
• 公開（公告）號: CN111363778A
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發明（設計）人: 萬謙;王銳鋒;向俊蓓;蔣小輝
• 申請（專利權）人: 成都新生命霍普醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;C12N5/0775;G16H50/70
• 代理公司: 成都行之專利代理事務所(普通合伙) 51220
• 代理人: 唐邦英

本發明公開了一種測定細胞增殖速率的方法，包括以下步驟：步驟1)、獲取細胞并將獲得的細胞置于培養皿中培養；步驟2)、在培養皿中依次加入消化液、DMEM低糖培養液，消化收獲細胞；步驟3)、調整細胞濃度后接種到96孔板上，然后在一段時間內按照時間先后順序多次采用MTT法檢測細胞數量；步驟4)、在酶標儀上測量各個時間點96孔板上每孔的OD570nm光密度值；步驟5)、以培養時間作為橫坐標，以OD570nm光密度值作為縱坐標，用Excel軟件做圖，再對圖“添加趨勢線”和“添加公式和擬合度R²”，得到的公式的斜率作為細胞增殖速率的估測值。本發明結合MTT法、Excel軟件和SPSS軟件，不經能夠精準測量細胞增殖速率，且能夠比較多種細胞樣本增殖速率是否存在顯著性差異。

技術領域

本發明涉及細胞培養技術領域，具體涉及一種測定細胞增殖速率的方法。

背景技術

細胞增長速率是細胞培養過程中的一種重要指標。如何準確測量細胞的增長速率和關鍵，如果測量誤差較大會影響對整個細胞培養的判斷。

傳統測量細胞增長速率的方法為：在某一時間點上測量一組數據，再進行平行比較。傳統方法雖然簡單直接，但是誤差很大，因為細胞增殖是一個動態過程，在增殖過程中可能有些波動，只在一個時間點上測定不能有效地反映細胞的增殖狀態，更精確的測量應該在一個時間段動態考察細胞的增殖狀態。

基于行業對細胞增長速率更精確的測量應該在一個時間段動態考察細胞的增殖狀態的認可，相關公司也推出了諸如“細胞動態分析儀”這樣的產品，但是“細胞動態分析儀”價格昂貴，所以還不普及。

發明內容

本發明的目的在于提供一種測定細胞增殖速率的方法，通過本發明所述方法不僅能夠獲得比較精確的細胞增殖速率，同時不會額外增加成本。

本發明通過下述技術方案實現：

一種測定細胞增殖速率的方法，包括以下步驟：

步驟1)、獲取細胞并將獲得的細胞置于培養皿中培養；

步驟2)、在培養皿中依次加入消化液、DMEM低糖培養液，消化收獲細胞，并對對細胞數量計數；

步驟3)、調整細胞濃度后接種到96孔板上，然后在一段時間內按照時間先后順序多次采用MTT法檢測細胞數量；

步驟4)、在酶標儀上測量各個時間點96孔板上每孔的OD570nm光密度值；

步驟5)、以培養時間作為橫坐標，以OD570nm光密度值作為縱坐標，用Excel軟件做散點圖，再對散點圖“添加趨勢線”和“添加公式和擬合度R²”，使得到的公式的斜率作為細胞增殖速率的估測值。

本發明通過在細胞依次進行培養、消化收獲細胞并計數后，將細胞調整濃度后后接種到96孔板上，然后在一段時間內按照時間先后順序多次采用MTT法檢測細胞數量，即實現在一個時間段動態考察細胞在不同時間點的增殖狀態的，再采用Excel軟件進行擬合，避免了傳統方法在一個時間點上進行平行比較導致的細胞增殖速率測量誤差大的問題，通過本發明所述方法不僅能夠獲得比較精確的細胞增殖速率，同時不會額外增加成本。

進一步地，還包括：

步驟6)、在SPSS軟件中，比較通過步驟1)-步驟5)獲得的不同細胞培養的斜率是否有顯著差異。

本發明結合MTT法、Excel軟件和SPSS軟件，不僅能夠精準測量細胞增殖速率，且能夠比較多種細胞樣本增殖速率是否存在顯著性差異。

進一步地，步驟1)中培養皿培養的條件為：

采用60mm培養皿，培養條件為37℃、5％CO₂，培養基為DMEM低糖培養液。