[發明專利]一種測定細胞增殖速率的方法在審
| 申請號： | 202010181603.1 | 申請日： | 2020-03-16 |
| 公開（公告）號： | CN111363778A | 公開（公告）日： | 2020-07-03 |
| 發明（設計）人： | 萬謙;王銳鋒;向俊蓓;蔣小輝 | 申請（專利權）人： | 成都新生命霍普醫學檢驗實驗室有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/06 | 分類號： | C12Q1/06;C12N5/0775;G16H50/70 |
| 代理公司： | 成都行之專利代理事務所(普通合伙) 51220 | 代理人： | 唐邦英 |
| 地址： | 610000 四川省成*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 測定 細胞 增殖 速率 方法 | ||
1.一種測定細胞增殖速率的方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟1)、獲取細胞并將獲得的細胞置于培養皿中培養；
步驟2)、在培養皿中依次加入消化液、DMEM低糖培養液，消化收獲細胞，并對對細胞數量計數；
步驟3)、調整細胞濃度后接種到96孔板上，然后在一段時間內按照時間先后順序多次采用MTT法檢測細胞數量；
步驟4)、在酶標儀上測量各個時間點96孔板上每孔的OD570nm光密度值；
步驟5)、以培養時間作為橫坐標，以OD570nm光密度值作為縱坐標，用Excel軟件做散點圖，再對散點圖“添加趨勢線”和“添加公式和擬合度R2”，使得到的公式的斜率作為細胞增殖速率的估測值。
2.根據權利要求1所述的一種測定細胞增殖速率的方法，其特征在于，還包括：
步驟6)、在SPSS軟件中，比較通過步驟1)-步驟5)獲得的不同細胞培養的斜率是否有顯著差異。
3.根據權利要求1所述的一種測定細胞增殖速率的方法，其特征在于，步驟1)中培養皿培養的條件為：
采用60mm培養皿，培養條件為37℃、5％CO2，培養基為DMEM低糖培養液。
4.根據權利要求1或3所述的一種測定細胞增殖速率的方法，其特征在于，所述DMEM低糖培養基包括以下組分：
10％胎牛血清、100IU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素。
5.根據權利要求1所述的一種測定細胞增殖速率的方法，其特征在于，所述消化液包括以下組分：
0.05％胰蛋白酶和0.02％EDTA。
6.根據權利要求1所述的一種測定細胞增殖速率的方法，其特征在于，步驟2)所述消化收獲細胞的具體過程為：
吸棄培養皿中的培養液，用無菌PBS洗兩次，然后加入消化液，孵育5分鐘后，加入完全的DMEM低糖培養液。
7.根據權利要求1所述的一種測定細胞增殖速率的方法，其特征在于，步驟3)中調整細胞濃度為10000/ml，96孔板上，接種量為每孔2000個細胞，接種體積為每孔200μl，每個實驗條件做3個重復孔。
8.根據權利要求1所述的一種測定細胞增殖速率的方法，其特征在于，步驟3)中所述MTT法的具體過程為：
在96孔板的每孔加入20μl濃度為5mg/ml的MTT試劑母液，然后把96孔板置回培養箱中培養4小時，再吸棄培養孔中的液體部分，加入150μl二甲基亞砜，反復吹打以使培養孔底部沉淀的藍色顆粒溶解。
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