[發明專利]一種利用Taqman qPCR法鑒定SNP突變的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 202010181602.7
• 申請日: 2020-03-16
• 公開（公告）號: CN111304304A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 萬謙;王銳鋒;蔣小輝;向俊蓓
• 申請（專利權）人: 成都新生命霍普醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858
• 代理公司: 成都行之專利代理事務所(普通合伙) 51220
• 代理人: 唐邦英

本發明公開了一種利用Taqman qPCR法鑒定SNP突變的方法及試劑盒，包括以下步驟：步驟1)、針對需要檢測的SNP位點分別合成正向PCR引物和反向PCR引物；步驟2)、針對需要檢測的SNP位點分別合成針對兩種SNP多態性的探針，兩種探針使用一樣的熒光淬滅染料對；步驟3)、在兩個反應管中均加入模板DNA、2×PCR反應液、正向PCR引物和反向PCR引物，在兩個反應管中分別加入針對兩種SNP多態性的探針；進行Taqman qPCR檢測；步驟4)、綜合兩個反應管的Taqman qPCR檢測結果，判斷模板DNA對于被檢測的SNP位點是雜合子還是純合狀態。本發明解決了現有Taqman qPCR檢測SNP突變的方法建立所需優化時間較長、效率低的問題。

技術領域

本發明涉及SNP突變檢測技術領域，具體涉及一種利用Taqman qPCR法鑒定SNP突變 的方法及試劑盒。

背景技術

對于傳統的Taqman qPCR檢測法，一般的思路是力圖在一個反應管中加入多重Taqman 探針，采用不同的染料、淬滅劑對，比如FAM/TAMRA對和VIC/TAMRA對，但是由于在一個反應管內加入了兩對不同的染料/淬滅劑，兩者之間大都存在相互干擾，一般需要較多輪次 的調整和優化，如果不需要搶時間的話，上述思路是成立的。但是，往往的緊急情況不給人 們充足的時間來調整優化方法，需要盡快推出簡單易上手的方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種利用Taqman qPCR法鑒定SNP突變的方法及試劑盒，以解 決現有Taqman qPCR檢測SNP突變的方法建立所需優化時間較長、效率低的問題。

本發明通過下述技術方案實現：

一種利用Taqman qPCR法鑒定SNP突變的方法，包括以下步驟：

步驟1)、針對需要檢測的SNP位點分別合成正向PCR引物和反向PCR引物；

步驟2)、針對需要檢測的SNP位點分別合成針對兩種SNP多態性的探針，兩種探針使 用一樣的熒光淬滅染料對；

步驟3)、在兩個反應管中均加入模板DNA、2×PCR反應液、正向PCR引物和反向PCR引物，在兩個反應管中分別加入針對兩種SNP多態性的探針，進行Taqman qPCR檢測；

步驟4)、綜合兩個反應管的Taqman qPCR檢測結果，判斷模板DNA對于被檢測的SNP位點是雜合子還是純合狀態；

其中，步驟1)和步驟2)的順序可交換。

本發明通過合成針對需要檢測的SNP位點的正向PCR引物和反向PCR引物、合成針對 兩種SNP多態性的探針，進行Taqman qPCR檢測，檢測時將兩種SNP多態性的探針分別加入兩個試管，綜合兩個反應管的Taqman qPCR檢測結果，判斷模板DNA對于被檢測的SNP 位點是雜合子還是純合狀態。本發明所述方法檢測時間短，操作簡單，省去了一般傳統方法中優化多重探針混合的步驟，能快速形成檢測方法，用空間換取了時間精力，在某些緊急特殊的情況下有適用性，能爭取到寶貴的時間和精力的節省，適用性好。如此，本發明解決了現有Taqman qPCR檢測SNP突變的方法建立所需優化時間較長、效率低的問題。

進一步地，兩種探針在5’端都用FAM染料標記，在3’端都使用淬滅劑TAMRA。

進一步地，還包括步驟5)、利用一代DNA測序結果驗證Taqman qPCR檢測結果。

進一步地，Taqman qPCR檢測至少進行40個循環。

進一步地，Taqman qPCR檢測的反應條件為：

95℃反應10分鐘，然后如下進行40個循環：95℃反應15秒，60℃反應1分鐘。