[發明專利]一種利用Taqman qPCR法鑒定SNP突變的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 202010181602.7
• 申請日: 2020-03-16
• 公開（公告）號: CN111304304A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 萬謙;王銳鋒;蔣小輝;向俊蓓
• 申請（專利權）人: 成都新生命霍普醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858
• 代理公司: 成都行之專利代理事務所(普通合伙) 51220
• 代理人: 唐邦英

1.一種利用Taqman qPCR法鑒定SNP突變的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1)、針對需要檢測的SNP位點分別合成正向PCR引物和反向PCR引物；

步驟2)、針對需要檢測的SNP位點分別合成針對兩種SNP多態性的探針，兩種探針使用一樣的熒光淬滅染料對；

步驟3)、在兩個反應管中均加入模板DNA、2×PCR反應液、正向PCR引物和反向PCR引物，在兩個反應管中分別加入針對兩種SNP多態性的探針，進行Taqman qPCR檢測；

步驟4)、綜合兩個反應管的Taqman qPCR檢測結果，判斷模板DNA對于被檢測的SNP位點是雜合子還是純合狀態；

其中，步驟1)和步驟2)的順序可交換。

2.根據權利要求1所述的一種利用Taqman qPCR法鑒定SNP突變的方法，其特征在于，兩種探針在5’端都用FAM染料標記，在3’端都使用淬滅劑TAMRA。

3.根據權利要求1所述的一種利用Taqman qPCR法鑒定SNP突變的方法，其特征在于，還包括步驟5)、利用一代DNA測序結果驗證Taqman qPCR檢測結果。

4.根據權利要求1所述的一種利用Taqman qPCR法鑒定SNP突變的方法，其特征在于，所述Taqman qPCR檢測至少進行40個循環。

5.根據權利要求1所述的一種利用Taqman qPCR法鑒定SNP突變的方法，其特征在于，所述Taqman qPCR檢測的反應條件為：

95℃反應10分鐘，然后如下進行40個循環：95℃反應15秒，60℃反應1分鐘。

6.根據權利要求1所述的一種利用Taqman qPCR法鑒定SNP突變的方法，其特征在于，所述Taqman qPCR檢測采用ABI Stepone Plus定量PCR儀。

7.一種利用Taqman qPCR法鑒定SNP突變的試劑盒，其特征在于，包括：

針對需要檢測的SNP位點分別合成的正向PCR引物和反向PCR引物；針對需要檢測的SNP位點分別合成的針對兩種SNP多態性的探針，兩種探針使用一樣的熒光淬滅染料對。

8.根據權利要求7所述的利用Taqman qPCR法鑒定SNP突變的試劑盒，其特征在于，還包括2×PCR反應液。