[發(fā)明專利]一種擬南芥中抗性代謝物Arabidopsides的純化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010180438.8
• 申請(qǐng)日: 2020-03-16
• 公開（公告）號(hào): CN111420428B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 俞陸軍;張雪;戴陽(yáng)朔;周穎;肖仕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)
• 主分類號(hào): B01D15/26
• 分類號(hào): B01D15/26;B01D11/04;G01N30/02;G01N30/34
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 孫鳳俠

本發(fā)明公開了一種擬南芥中抗性代謝物Arabidopsides的純化方法。本發(fā)明應(yīng)用高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)擬南芥抗性代謝物Arabidopsides的乙醇浸出液進(jìn)行抗性代謝物Arabidopsides檢測(cè)，再應(yīng)用硅膠柱分離系統(tǒng)進(jìn)行分離，即可得到所述抗性代謝物Arabidopsides。本發(fā)明應(yīng)用硅膠柱分離系統(tǒng)、高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)結(jié)合的方法，最大限度的成功純化得到了包括Arabidopside A、Arabidopside B和Arabidopside D在內(nèi)的至少3種類型的Arabidopsides。該方法高效提取純化得到了多種抗性代謝物Arabidopsides，且該方法簡(jiǎn)單易行、成本低，對(duì)植物在防御病蟲害的改善與進(jìn)步方面具有重要指導(dǎo)意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物代謝物技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及一種擬南芥中抗性代謝物Arabidopsides的純化方法。

背景技術(shù)

糖脂修飾復(fù)合物ARs(Arabidopsides)是一類新型響應(yīng)植物逆境的信號(hào)分子。12-氧-植物二烯酸(12-oxo-phytodienoic acid，OPDA)和去甲基-含氧植物二烯酸(Demethylation-12-oxo-phytodienoic acid，dn-OPDA)是合成茉莉酸類物質(zhì)(JAs)的重要前體，兩者作為重要的信號(hào)分子在植物生長(zhǎng)發(fā)育和響應(yīng)逆境應(yīng)答中起重要作用。在擬南芥中，已鑒定出多種含有OPDA和dn-OPDA的單半乳糖甘油糖酯(MGDG)和雙半乳糖甘油糖酯(DGDG)的Arabidopsides。根據(jù)含有OPDA或dn-OPDA的數(shù)量和組合的差異，目前已發(fā)現(xiàn)的抗性代謝物Arabidopsides分為以下7種類型：OPDA-dnOPDA MGDG(AR-A)、OPDA-OPDAMGDG(AR-B)、OPDA-dnOPDA DGDG(AR-C)、OPDA-OPDA DGDG(AR-D)；OPDA-OPDA-OPDA MGDG(AR-E)、dnOPDA-OPDA-OPDA MGDG(AR-G)。研究表明，擬南芥中抗性代謝物Arabidopsides的積累能夠被低氧脅迫、機(jī)械損傷和過(guò)敏性反應(yīng)所誘導(dǎo)，同時(shí)，外源施加AR-A能夠促進(jìn)葉片的衰老。另外，AR-E包含至少9種同源物，在植物衰老以及響應(yīng)外界逆境過(guò)程中起著重要的調(diào)控作用。

因此，抗性代謝物Arabidopsides可作為響應(yīng)植物逆境的信號(hào)分子，為茉莉酸(JA)信號(hào)通路提供新的研究對(duì)象，為多種激素網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)的功能研究提供理論基礎(chǔ)；同時(shí)，基于抗性代謝物Arabidopsides可引發(fā)防御基因起到保護(hù)植物體的作用的理論研究，抗性代謝物Arabidopsides的制備為植物在防御病蟲害的改善與進(jìn)步方面提供實(shí)踐基礎(chǔ)。

現(xiàn)有技術(shù)中提及的植物代謝物的提取純化方法中，大部分通過(guò)萃取和色譜分離進(jìn)行分離、提純，從而提高樣品待測(cè)物質(zhì)的含量，運(yùn)用放射免疫法、紫外或熒光的方法檢測(cè)植物代謝物。但以上方法大多程序繁瑣、耗時(shí)多、耗材量大、成本高昂。現(xiàn)有專利CN107870218A公開了一種水稻中抗性代謝物Arabidopsides的檢測(cè)方法，應(yīng)用高效液相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)水稻中的抗性代謝物Arabidopsides，最終檢測(cè)到了抗性代謝物Arabidopsides的AR-B和AR-F類型，并對(duì)其進(jìn)行了定性和定量。但是，該專利僅闡述了抗性代謝物Arabidopsides的檢測(cè)方法，不能直接提取純化植物中的該類物質(zhì)應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)或生產(chǎn)。因此，進(jìn)一步研究抗性代謝物Arabidopsides的提取純化方法，在對(duì)于病蟲害的防御方面具有重要的指導(dǎo)意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有植物代謝物難以純化、成本高昂的缺陷和不足，提供一種擬南芥中抗性代謝物Arabidopsides的純化方法。本發(fā)明基于可檢測(cè)的基礎(chǔ)，應(yīng)用硅膠柱分離系統(tǒng)進(jìn)行分離，對(duì)沖洗硅膠柱的沖洗液的組分配比進(jìn)行優(yōu)化，最大限度的從擬南芥中提取純化得到了包含了Arabidopside A、Arabidopside B和Arabidopside D至少3種類型的抗性代謝物Arabidopside，為應(yīng)用抗性代謝物Arabidopsides在病蟲害上的防御提供了依據(jù)和方法。