[發明專利]一種擬南芥中抗性代謝物Arabidopsides的純化方法

有效

• 申請號: 202010180438.8
• 申請日: 2020-03-16
• 公開（公告）號: CN111420428B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 俞陸軍;張雪;戴陽朔;周穎;肖仕
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: B01D15/26
• 分類號: B01D15/26;B01D11/04;G01N30/02;G01N30/34
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 孫鳳俠

1.一種擬南芥中抗性代謝物Arabidopsides的純化方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.將含有抗性代謝物Arabidopsides的擬南芥乙醇浸出液中的乙醇蒸干，得乙醇浸出物；

S2.將步驟S1得到的乙醇浸出物用甲醇溶解后，加入硅膠柱中，用沖洗液沖洗硅膠柱，得溶解液；

S3.取步驟S2得到的部分溶解液，吹干，溶解，得到混合溶液，運用高效液相色譜與質譜聯用技術對抗性代謝物Arabidopsides進行檢測；

S4.根據步驟S3的檢測結果，取沖洗液溶解的干物質，用甲醇溶解，以OPDA為標準品，分離，收集不同區域的物質；

S5.用含有甲醇和二氯甲烷的溶液溶解步驟S4得到的物質，過濾，吹干，重復步驟S3；

S6.根據檢測結果，進行制備液相分離，組分收集，重復步驟S3，確定Arabidopsides的位置和性質，即可得到所述抗性代謝物Arabidopsides；

其中，所述抗性代謝物Arabidopsides為Arabidopsides A、Arabidopsides B或Arabidopsides D中的任意一種或幾種。

2.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟S3所述高效液相色譜與質譜聯用技術中所用的流動相A為甲醇、乙腈、水和揮發性酸的混合溶液，所述甲醇、乙腈的體積比為1：1，所述揮發性酸的體積分數為0.1％。

3.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟S3所述高效液相色譜與質譜聯用技術中所用的流動相B為揮發性酸和水的混合溶液，所述揮發性酸的體積分數為0.1％。

4.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，所述沖洗液為體積比為乙酸乙酯：甲醇＝5：1的混合溶液或體積比為乙酸乙酯：甲醇＝3：1的混合溶液。

5.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟S4所述分離的方法為薄層層析法。

6.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟S5所述含有甲醇和二氯甲烷的溶液中，甲醇和二氯甲烷的體積比為1：1。

7.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟S3所述混合溶液中氯仿、甲醇和乙酸銨的體積比為300：665：35。

8.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟S1所述擬南芥乙醇浸出液的提取方法，包括以下步驟：

(1)取擬南芥植株，洗凈，35℃～40℃烘干；

(2)在步驟(1)烘干后的樣品中加入無水乙醇，封閉環境下靜置22～26h，得乙醇浸出液；

(3)過濾步驟(2)得到的乙醇浸出液，收集濾液，重復步驟(2)，收集濾液，即為含有抗性代謝物Arabidopsides的擬南芥乙醇浸出液。

9.根據權利要求8所述的純化方法，其特征在于，步驟(1)所述擬南芥為經過損傷誘導處理后的擬南芥。